以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
DAPI溶液(1mg/ml) | DAPI solution,1mg/ml | 1ml | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
本產(chǎn)品為DAPI水溶液,濃度為1mg/ml。使用時根據(jù)實驗不同直接將本產(chǎn)品用相應(yīng)溶液稀釋到工作濃度。 CAS號:28718-90-3 分子式:C16H15N5·2HCl 分子量:350.25 儲存條件:?20℃避光保存,有效期至少2年 純度:≥90% (HPLC和 TLC) DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)是一種能夠與DNA中大部分A,T堿基相互結(jié)合的熒光染料﹐常用于熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細(xì)胞膜﹐它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。當(dāng)DAPI與雙鏈DNA結(jié)合時,大吸收波長為358nm,大發(fā)射波長為461nm。DAPI的發(fā)射光為藍(lán)色,且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)射波長僅有少部分重疊,可以利用這項特性在單一的樣品上進(jìn)行多重?zé)晒馊旧?/span> |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
α-胞襯蛋白(SPTAN1)英文名稱:SPTAN1 ELISA Kit鈣連蛋白抗體包裝500g
α白蛋白(AFM)英文名稱:AFM ELISA Kit二氫嘧啶相關(guān)蛋白2抗體包裝50mg
α2-纖溶抑制因子(α2PI)英文名稱:α2PI ELISA Kit色P450ⅡE1抗體包裝1g
α2-巨球蛋白(α2M)英文名稱:α2M ELISA Kit趨化因子受體1抗體包裝100g
α2-HS糖蛋白(αHSG)英文名稱:αHSG ELISA Kit磷化原癌基因c-Raf抗體包裝25g
α1-微球蛋白(α1M)英文名稱:α1M ELISA Kit磷化致癌基因C-Myc抗體包裝500g
α1-性糖蛋白(α1AGP)英文名稱:α1AGP ELISA KitCD33抗體包裝1g
α1-抗(α1AT)英文名稱:α1AT ELISA Kit磷化原癌基因c-kit抗體包裝5g
Zeste同源物增強(qiáng)子1(EZH1)英文名稱:EZH1 ELISA Kit磷化原癌基因c-Jun抗體包裝1g
YY肽(PYY)英文名稱:PYY ELISA Kit離子通道蛋白3抗體包裝25g
X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白6(XRCC6)英文名稱:XRCC6 ELISA Kit磷化周期E抗體包裝5g
X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白5(XRCC5)英文名稱:XRCC5 ELISA Kit磷化分裂周期蛋白25C抗體包裝250mg
X-框結(jié)合蛋白1(XBP1)英文名稱:XBP1 ELISA Kit磷化周期依賴性激9抗體包裝1g
Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)英文名稱:WFS1 ELISA Kit磷化Connexin 43蛋白抗體包裝5g
WNT1誘導(dǎo)信號通道蛋白1(WISP1)英文名稱:WISP1 ELISA Kit絲切蛋白抗體包裝100g
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:純度98%以上異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G試劑盒乙酰纈草三酯;Acevaltratum
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR異質(zhì)性胞核核糖核蛋白E試劑盒乙酰哈巴苷;8-O-Acetylharp
CGMCC1.5361=JCM14000資源名稱: 黃微球菌 質(zhì)量規(guī)格:含量測定異質(zhì)性胞核核糖核蛋白D試劑盒異型南五味子丁;Heterocliti
DAPI溶液(1mg/ml)食淀粉乳桿 5-氟-2-甲?;剿崴?帶狀皰疹病IgM抗體Elisa
冷海水黃桿 4-溴甲基四氫吡喃Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激Elisa
球孢白僵 六基鈷(II)鐵(II)酸乙型肝炎病E抗體Elisa
枯草芽孢桿斯氏亞種 二(六氟銻酸)三乙(五甲基環(huán)戊二烯基)銠(III)乙型肝炎病核心抗體Elisa
秦氏蜜環(huán) 曲安西龍肝再生增強(qiáng)因子Elisa
嗜鹽擬諾卡氏 C. I. 顏料紅 49糖化血紅蛋白A1cElisa
瘦弱鹽扁平 2,3-二氟苯重組高遷移率族蛋白B1Elisa
相思根瘤 2-氟-4-單純皰疹病2IgG抗體Elisa
美澳型核果褐腐病 2-溴-6-苯單純皰疹病2IgM抗體Elisa
米曲霉 6-氟-2-吡啶磺酰單純皰疹病6IgG抗體Elisa
白僵 2-甲氧基-3-氟-5-溴吡啶單純皰疹病6IgM抗體Elisa
溶壁(lywallzyme) 3-溴-2-甲氧基-5-三氟甲基吡啶單純皰疹病7IgG抗體Elisa
大腸埃希氏 Fmoc-Lys(5-FAM)-OH單純皰疹病7IgM抗體Elisa
美澳型核果褐腐病 3-溴-5-EB病IgG抗體Elisa
大腸埃希 十八烷基二甲基叔EB病IgM抗體Elisa