詳細(xì)介紹
實驗流程:
1. 實驗前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備;
2. 加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多,更加方便我們的科研學(xué)者進行科學(xué)實驗,是科研實驗的好伙伴。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
anti-toxIgG ELISA Kit | GOY-E99824 |
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進行測試。
大鼠生長激素(GH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠腎素(REN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠褪黑素(MT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠降鈣素(CT) 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠C-肽 (C-P) 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH) 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠骨保護素(OPG)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠催乳素(PRL)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠肌紅蛋白(MYO)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠肌鈣蛋白T(Tn-T)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠肌鈣蛋白I(Tn-I)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPPA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠堿性磷酸酶(ALP) 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
anti-toxIgG抗弓形體IgG抗體ELISA KitPhospho-PAK2 (Ser20) 磷酸化p21激活激酶2抗體 規(guī)格: 0.1ml
EIF2C1/Ago1 真核翻譯起始因子2C1抗體 規(guī)格: 0.2ml
L-enk 亮氨酸腦啡肽抗體 規(guī)格: 0.1ml
DCUN1D2 DCN1樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
c-ABL1/2(Tyr393/429) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 規(guī)格: 0.1ml
EIG121 雌激素誘導(dǎo)基因121蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
ASAP3 GTP酶激活蛋白ASAP3抗體 規(guī)格: 0.2ml
ACY 3/HCV-HCBP1 丙型肝炎病毒核結(jié)合蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.2ml
CLPTM1L/CRR9 順氯氨鉑耐藥相關(guān)蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mitofusin 2/MFN2 線粒體融合蛋白Mfn2抗體 0.1ml
phospho-c-Jun(Ser243) 磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1ml
C6orf192 8號染色體開放閱讀框192抗體 規(guī)格: 0.2ml
UBTD1 泛素結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-LAT (Tyr191) 磷酸化T細(xì)胞活化連接蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。