化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
商品介紹：
產(chǎn)品背景： 細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過(guò)程等方面起著十分重要的作用。 在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過(guò)程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過(guò)程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS 高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。 檢測(cè)原理： 在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。 Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結(jié)合?？赏ㄟ^(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。用標(biāo)記了APC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過(guò)程中也會(huì)發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會(huì)結(jié)合Annexin V-APC。 Annexin V-APC 通常與細(xì)胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測(cè)凋亡細(xì)胞。常用的染料是7-AAD。正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，7-AAD 能夠透過(guò)細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。 7-AAD/Annexin V-APC試劑盒將Annexin Ⅴ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。壞死細(xì)胞可以同時(shí)與Annexin V-APC和7-AAD 結(jié)合顯色，而7-AAD 則被排除在活細(xì)胞(APC陰性)和早期凋亡細(xì)胞(APC陽(yáng)性)之外。在沒(méi)有巨噬細(xì)胞的情況下，凋亡的后階段會(huì)像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個(gè)細(xì)胞的解體，從而使凋亡晚期的細(xì)胞也同時(shí)被APC和7-AAD 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽(yáng)性。 儲(chǔ)存條件：染色液2-8℃避光保存；結(jié)合液2-8℃保存；長(zhǎng)期不用-20℃保存。 Annexin V-APC染色液避免反復(fù)凍融，凍融2次以上可能會(huì)失效。長(zhǎng)期保存分裝后-20℃保存。 有效期：一年。 |
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
格列齊特英文名稱： Mizolastine先天性紅生成異常性貧血蛋白1抗體包裝100ml
磺丁脲英文名稱： Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關(guān)粘附分子16抗體包裝25ml
米格列英文名稱： Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關(guān)粘附分子21抗體包裝100g
米格列奈鈣英文名稱： Nelarabine貓眼綜合征染色體候選基因5抗體包裝25g
瑞格列奈英文名稱： Nesiritide AcetateCUE結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝5g
特力利汀;氫替格列汀英文名稱： Netilmicin Sulfate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白52抗體包裝1g
鹽二雙胍英文名稱： Netilmicin Sulfate補(bǔ)體片段C3c抗體包裝5g
(+)-（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Nystatin卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白68抗體(皮膚T淋巴淋巴瘤相關(guān)抗原)包裝5MG
(+)2-基?。?biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Olanzapine卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體包裝1g
(+/-)-兒茶精（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Olanzapine卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白21抗體包裝5g
(S)-(+)-（普瑞巴林雜質(zhì)）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ondansetron HCl卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體(狀狀腺癌編碼蛋白)包裝25g
1,4-對(duì)醌（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ondansetron HCl周期依賴激2相關(guān)蛋白2抗體包裝5g
1-基海因鹽鹽（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ornidazole1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框201抗體包裝100mg
1-基海因（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ornidazole卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體包裝25g
10％A晶型咪唑英文名稱： Oxaliplatin卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白80抗體包裝5g
酚節(jié)桿菌Arthrobacter│chlorophenolicus 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)血小板衍生生長(zhǎng)因子BB試劑盒野百合堿;Monocrotaline
副豬嗜血桿菌Haemophilus│parasuis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血小板衍生生長(zhǎng)因子AA試劑盒鹽育亨賓;Yohimbine hydr
: AS4.360資源名稱: 燼灰鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,培養(yǎng)級(jí)血小板型磷果糖激試劑盒巖白菜;Bengenin
Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒鐮孢霉 2-硝基-4-異苯O-6-甲基鳥(niǎo)嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移Elisa
漏斗狀側(cè)耳（鳳尾菇） 茴香酸乙酯O-6-甲基鳥(niǎo)嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移Elisa
貝爾氏屬 3-氨基-5-噻吩-2-羧酸甲酯DNA甲基化轉(zhuǎn)移1Elisa
類(lèi)黃假單胞 甲基酸頻哪酯DNA甲基化轉(zhuǎn)移2Elisa
葡萄座腔 2-氟-6-三氟甲基吡啶DNA甲基化轉(zhuǎn)移3AElisa
粗糙脈孢 4-溴-3-氟DNA甲基化轉(zhuǎn)移3BElisa
喜堿運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 5-氯色鹽酸鹽基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4Elisa
蠟樣狀芽孢桿 2,5-二氯-3-吡啶內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核心信號(hào)1Elisa
豬放線桿 3-三氟甲基-5-甲基吡唑傷寒抗原Elisa
膜醭畢赤酵母 N-苯基馬來(lái)酰亞抗磷酸5bElisa
蘇云金芽胞桿 2,3-二氨基-6-甲氧基吡啶鹽酸鹽甲狀旁腺134Elisa
羊肚伴生 4-甲基-5-噻唑基乙己酸酯氨基端前心鈉肽Elisa
黃棕色鏈霉 4-甲基-5-噻唑基乙丁酸酯含卷曲螺旋域蛋白49Elisa
德?tīng)柌加墟呓湍?/span> N--3,4-亞甲二氧基苯鹽酸鹽酮酸脫氫Elisa
乳桿 1-甲基-3-苯基硫酸酚Elisa
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