商品介紹:
用途: 神經(jīng)HRP示蹤TMB(四甲基聯(lián))顯色,反應(yīng)較DAB法靈敏。 注意事項(xiàng): 主要由TMB孵育液、、乙酸鈉緩沖液等組成,染色后呈藍(lán)色。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:50T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
柚皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1,8-Dihydroxyanthraquinone胚胎干關(guān)鍵蛋白抗體包裝25ml
右旋蛇菰寧英文名稱: Chlorhexidine hydrochloride核小體組裝蛋白1抗體包裝500ml
右旋延胡索乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methoxyphenamine HClN-鈣粘附分子抗體包裝100g
幼枝含斷氧化馬錢子甙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Potassium guaiacolsulfonate hemihydrate核受體輔助抑制因子1抗體包裝25g
余甘子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Propyl gallate腎小球粘附分子受體抗體包裝100g
魚腥草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chlormezanone巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體包裝25g
羽扇豆(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Calcium hydrogenphosphate dihydrate巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體包裝5g
羽扇豆鹼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfamethazine蛋白激錨定蛋白抗體包裝1g
玉米須(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfaguanidine絲或半胱蛋白解抑制蛋白1抗體包裝5g
玉葉金花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fenbufen黑色瘤硫軟骨蛋白多糖抗體包裝100ml
郁金(溫郁金)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Troxerutin突觸粘附分子3抗體包裝100g
預(yù)知子(三葉木通)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diprophylline跨膜硫軟骨蛋白聚糖C抗體包裝25g
愈創(chuàng)木英文名稱: Bendazol hydrochloride神經(jīng)腫瘤Nova1抗原抗體包裝500g
鳶尾苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chloroquine diphosphateB淋巴鏈接激活蛋白抗體包裝1g
鳶尾黃-7-O-木糖基葡萄糖苷英文名稱: Promethazine Hydrochloride中性鞘磷脂2抗體包裝250mg
: C.DAi-426資源名稱: 亞利桑那沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%狀腺激受體β試劑盒草烏;Bulleyaconitine
皮落青霉Penicillium│solitum var. crustosum (Thom) Bridge D. Hawksw. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品狀腺過(guò)氧化物試劑盒長(zhǎng)春新堿;Vincristine
阿拉斯加鞘盒菌Sphingopyxis│alaskensis 質(zhì)量規(guī)格:>99%狀腺非肽激抗體試劑盒長(zhǎng)春花堿;Vinblastine
神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)球形賴氨酸芽孢桿 5-溴-6-煙酸甲酯中性膽固Elisa
滑假絲酵母 2-氨基-1-(2,4-二氟苯基)乙酮鹽酸鹽中性粒彈性蛋白Elisa
波蘭青霉 2-(甲基)-1-甲基-1H-咪唑鹽酸鹽中性粒堿性磷酸Elisa
緩慢葡萄球 3-溴-2-氟中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白Elisa
釀酒酵母 3-氨基-5-氟中性內(nèi)肽;腦啡肽Elisa
植物乳桿 鹽酸特比萘酚腫瘤壞死因子αElisa
赤曲霉 2,5-二-3-腫瘤壞死因子βElisa
黑烏霉 2-溴三苯腫瘤壞死因子γElisa
煙色毛霉 噻螨酮腫瘤壞死因子可溶性受體ⅠElisa
嗜熱鏈球 2-溴-4-(三氟甲基)嘧啶腫瘤壞死因子可溶性受體ⅡElisa
Aquibacillus halophilus 全氟十二烷基三硅烷腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體Elisa
角鱗灰鵝膏 四-(4-氨基苯)乙烯周期蛋白G2Elisa
鐮孢 三辛基氧化磷周生長(zhǎng)因子Elisa
泡囊短波單胞 4-氟-3-甲氧基轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子αElisa
溜曲霉 2-氟-6-甲氧基苯酸轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βElisa