商品介紹:
用途: 神經(jīng)HRP示蹤DAB(四甲基聯(lián))顯色。 注意事項(xiàng): 主要由DAB孵育液、、乙酸鈉緩沖液等組成,染色后呈棕色。 儲(chǔ)存條件:-20℃,避光,12個(gè)月 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:神經(jīng)HRP示蹤顯色液(DAB法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:50T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
鳶尾黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dyclonine hydrochloride核受體蛋白NR2E1抗體包裝5g
原阿片堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SGI1027神經(jīng)外營(yíng)養(yǎng)蛋白2抗體包裝250mg
原百部堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bromhexine HCl腦特異性蛋白BPX抗體包裝100mg
原兒茶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: R848,Resiquimod核纖層蛋白A識(shí)別因子抗體包裝100mg
原兒茶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-(Hydroxymethyl)nicotinamideNOGO相互作用線粒體蛋白1抗體包裝100g
原花青B1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pasiniazid神經(jīng)元X連鎖蛋白/兒童自閉癥相關(guān)蛋白抗體包裝25g
原花青B2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trepibutone神經(jīng)元Y連鎖蛋白抗體(兒童自閉癥相關(guān)蛋白)包裝5g
原花青(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trapidil神經(jīng)連接蛋白2抗體包裝1g
原人參二(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: CINAMETIC ACIDNIPA樣蛋白3抗體包裝5g
原人參三(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Orazamide軸突生長(zhǎng)誘導(dǎo)因子3抗體包裝100ml
原薯蕷皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3-ETHYL-3-METHYLGLUTARIMIDE軸突蛋白3抗體包裝25ml
原蘇木B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dequalinium chloride1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框63抗體包裝1g
原偽金絲桃英文名稱: BERBERINE ACID SULFATE神經(jīng)元特異性蛋白家族成員2抗體包裝100g
遠(yuǎn)志(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Domiphen bromide神經(jīng)前體發(fā)育下調(diào)蛋白4抗體包裝25g
遠(yuǎn)志口山;遠(yuǎn)志山III(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ulipristal acetate泛結(jié)合E2F抗體包裝25g
海綿假單胞菌Pseudomonas│pachastrellae 質(zhì)量規(guī)格:>98%狀腺激免疫球蛋白試劑盒長(zhǎng)春質(zhì)堿;Catharanthine
ATCC10382資源名稱: 抗生鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR狀旁腺激相關(guān)蛋白試劑盒白果雙黃;Bilobetin
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品狀旁腺激1受體試劑盒3-表熊果;3-Epiursolic
神經(jīng)HRP示蹤顯色液(DAB法)酵母 2-苯并噻唑-6-甲酸乙酯轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1Elisa
緊密青霉 4-氨基-3,5-二苯轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2Elisa
枯草芽孢桿 (芐氧羰基)三苯基溴化轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3Elisa
葡萄座腔 4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸轉(zhuǎn)錄因子Elisa
釀酒酵母 三-(4-叔丁基苯基)磷酸酯轉(zhuǎn)鐵蛋白Elisa
單色革蓋 D-3-(1-萘基)-氨酸轉(zhuǎn)鐵蛋白受體Elisa
鹽古桿 奈帕芬轉(zhuǎn)移因子Elisa
蒂莫內(nèi)馬賽 2-氨基-3-苯甲?;?alpha-(甲硫基)苯乙酰總β淀粉樣蛋白Elisa
黑芝 2-甲基-2-基-1,3-烷二總膽固Elisa
枯草芽孢桿 三季戊四總膽紅Elisa
米曲霉 3-溴-4-氟苯甲酰溴總膽汁酸Elisa
大豆慢生根瘤 雙芬酸二乙鹽總蛋白Elisa
木拉克德克斯酵母 5-異基吡唑-3-甲酸乙酯總抗氧化能力Elisa
大腸埃希氏噬體 n-甲氧基-n-甲基乙??傝F結(jié)合力Elisa
球孢白僵 R-N-Cbz-3-甲酸總脂肪酸Elisa