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詳細(xì)介紹
商品介紹：
PKH67/PI 雙染細(xì)胞毒性檢測試劑盒是利用細(xì)胞熒光染料PKH67和PI對細(xì)胞進(jìn)行染色，利用PKH67標(biāo)記靶細(xì)胞，PI標(biāo)記死的靶細(xì)胞來區(qū)分不同的細(xì)胞，活的靶細(xì)胞成綠色，死的靶細(xì)胞成紅色和綠色，從而檢測細(xì)胞毒性作用。 根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，可以用來檢測化合物的細(xì)胞毒性作用。也可以用來檢測殺傷性T 細(xì)胞或NK 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。 熒光染料PKH67是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料，可以標(biāo)記活體細(xì)胞，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞。對細(xì)胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，有著強(qiáng)而穩(wěn)定的綠色熒光。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。 在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半，根據(jù)這一特性，它可被用于檢測細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。PKH67標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測出未分裂細(xì)胞，分裂一次(1/2的熒光強(qiáng)度)，二次(1/4的熒光強(qiáng)度)，三次(1/8的熒光強(qiáng)度)，以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。PKH67可檢測分裂次數(shù)多達(dá)六次甚至更多。 除了用于細(xì)胞增殖檢測，PKH67 還可以用于細(xì)胞的體外盒體內(nèi)示蹤，標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。 PKH67標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長達(dá)數(shù)周之久，它常被用來做活體細(xì)胞檢測實(shí)驗(yàn)和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。PKH67 毒性較小，不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖伲鼫?zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 PKH67/PI標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測。 PKH67標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=490 nm,λem=502 nm。流式檢測時(shí)的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長為502nm，使用流式細(xì)胞儀檢測時(shí)可以采用FL1 detection channel。PI標(biāo)記細(xì)胞呈紅色熒光，流式檢測時(shí)的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長為647nm，使用流式細(xì)胞儀檢測時(shí)可以采用FL2 detection channel。 PKH67標(biāo)記的細(xì)胞除了流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞毒性外，還可單染后用于細(xì)胞增殖檢測，或者用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。 儲存條件：-20℃避光保存。 |
產(chǎn)品屬性：
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：500T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
Pregnenolone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 6-TG/ThioguanineCD9蛋白抗體包裝100g
Progesterone（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 6-TG/ThioguanineCD23/FcεRII抗體包裝25g
Promestriene(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： All-Trans-Retinoic Acid\TretinoinCD27抗體包裝500g
RNH-奧美沙坦酯雜質(zhì)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： All-Trans-Retinoic Acid\TretinoinCD30抗體包裝25g
Rosiglitazone HCL (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： BicalutamideCD43抗體包裝5g
Rosiglitazone Maleate（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： BicalutamideCD48抗體包裝1g
Rosiglitazone（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Busulfan/MyleranCD44抗體包裝5g
Sitagliptin phosphate monoh...英文名稱： Busulfan/Myleran整合αX抗體包裝100g
Sivelestat sodium (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Lomustine表面趨化因子受體5抗體包裝25g
Sorafenib tosylate（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： LomustineCD2抗體包裝25g
Stanozolol（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Hydroxyurea/HydroxycarbamideC-肽抗體包裝5g
Tamoxifen Citrate （標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Hydroxyurea/Hydroxycarbamide鈣結(jié)合蛋白抗體包裝1g
Tetrabenazine(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Toremifene CitrateC-反應(yīng)蛋白抗體包裝5g
Toremifene Citrate（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Toremifene CitrateC-反應(yīng)蛋白單克抗體包裝100g
Triamcinolone Acetonide(標(biāo)準(zhǔn)品...英文名稱： Toremifene Citrate環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白抗體包裝25g
產(chǎn)黑假交替單胞菌Pseudoalteromonas│nigrifaciens 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血管抑/血管穩(wěn)定蛋白試劑盒血竭;Cochinchinenin
ATCC35674資源名稱: 自養(yǎng)黃色桿菌 質(zhì)量規(guī)格：>98%,5-HT2A高效選擇性激動(dòng)劑血管性血友病因子裂解試劑盒西貝母堿苷;Sipeimine-3β-D
耐熱克魯維酵母Kluyveromyces│thermotolerans 質(zhì)量規(guī)格：>99%血管舒緩激肽試劑盒繡球酚 ;Hydrangenol
PKH67/PI雙染細(xì)胞毒性檢測試劑盒釀酒酵母 2-氯-4-氨基-6,7-二甲氧基喹唑啉絲聚合蛋白Elisa
印度芽孢桿 2-乙基-6-甲基-3-羥基吡啶腺病IgM抗體Elisa
枯草芽孢桿 4-溴-2-酚過氧化物3Elisa
棘孢木霉 2-氟-2-磷?；宜崛阴サ脱跽T導(dǎo)因子2Elisa
外皮毛霉 4-苯基-2-丁諾如病Elisa
釀酒酵母 α-異丁酸甲酯甘油三磷酸脫氫Elisa
阿爾通山堿線 4-氟苯甲脒鹽酸鹽激活BElisa
發(fā)根土壤桿 4-氟-3-甲低密度脂蛋白復(fù)合物Elisa
芽孢桿屬 3,4-二氟苯酮Egl九同源物Elisa
矩圓黑盤孢 N-正辛基-D-葡萄糖甘油三磷酸脫氫Elisa
假單胞 磺氯噠鈉百日咳IgG抗體Elisa
海水鹽單胞 6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉 鹽酸鹽硒蛋白P1Elisa
膜醭畢赤酵母 2-溴-3-甲基-5-硝基吡啶EB病IgA抗體Elisa
卷枝毛霉 2-氯-4-甲基-3-硝基吡啶脯氨酰羥化Elisa
釀酒酵母 反-1,2-環(huán)己烷二甲酸脯氨酰羥化2Elisa
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