商品介紹:
用途: 細胞周期分析、活細胞染色等 注意事項: Hoechst33342是一種熒光染料,可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的毒性較低。染色染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測??芍苯佑糜诠潭毎蚪M織的細胞核染色,也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。 儲存條件:-20℃,避光,6個月 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Hoechst33342染色液
英文名稱:Hoechst33342 Staining Solution
產(chǎn)品規(guī)格:10ml|50ml
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
明黨參(標準品)英文名稱: Nonoic acid甘酰核苷合成抗體包裝250mg
莫諾苷(標準品)英文名稱: Naphthalene-d8生長休止特定蛋白2抗體包裝1g
墨旱蓮(標準品)英文名稱: PentacosaneG蛋白γ11/Gγ11 抗體包裝5g
母丁香(標準品)英文名稱: 9,10-Dimethylanthracene磷化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體包裝1g
牡丹皮(標準品)英文名稱: 9,10-Diphenylanthraceneγ-谷酰轉(zhuǎn)肽7重鏈抗體包裝25g
牡丹皮苷C英文名稱: Diphenyl sulfide生長激2/胎盤特異性生長激抗體包裝5g
牡荊(標準品)英文名稱: 4,4′-Diaminodiphenyl ether高爾基體相關(guān)蛋白GM130抗體包裝25mL
牡荊-4''-O-葡萄糖苷英文名稱: Docosane胃泌抑制肽受體抗體包裝1g
牡荊葡萄糖苷(標準品)英文名稱: 4,4'-Thiodianiline粒-巨噬集落激因子受體α抗體包裝250mg
牡荊鼠李糖苷(標準品)英文名稱: γ-Dodecalactone硫轉(zhuǎn)移pi基因抗體包裝5g
木鱉子(標準品)英文名稱: Fenoxaprop-P接頭蛋白Gab 2抗體包裝5g
木芙蓉葉(標準品)英文名稱: 6-Hydroxynicotinic Acid葡萄糖6磷α/G6Pase-α抗體包裝1g
木瓜(標準品)英文名稱: 1-Heptanol糖磷脂酰肌抗體包裝5g
木蝴蝶苷A(標準品)英文名稱: Indene乙二1抗體包裝1g
木蝴蝶苷B(標準品)英文名稱: Eicosane核呼吸因子2抗體包裝250mg
副結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│paratuberculosis 質(zhì)量規(guī)格:BR,來源豬胰臟脾臟酪激試劑盒木蘭脂;magnolin
939=NCIMB10421=ATCC15442資源名稱: 銅綠假單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:AR,>99%皮質(zhì)抑/皮質(zhì)穩(wěn)定蛋白試劑盒馬;Maackiain
: F2資源名稱: 傷寒沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:進口原裝,98%皮質(zhì)/腎上腺試劑盒馬兜鈴 C ;Aristolochic
Hoechst33342染色液膠孢 乙脫氫Elisa
米氏假單胞 2-己基癸基-1-鹽皮質(zhì)Elisa
假單胞 6-氯-3H-苯并噻唑-2-酮膜聯(lián)蛋白ⅡElisa
纖細白僵 3-氨基-4-氟血管內(nèi)皮鈣黏蛋白Elisa
艾比湖嗜鹽堿紅 2-基吡啶細螺旋體病IgM 抗體Elisa
蘇云金芽孢桿 精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸轉(zhuǎn)運體樣蛋白4Elisa
Pseudomonas 5-溴噻吩-2-甲酸甲酯膜聯(lián)蛋白XIElisa
慶豐鏈霉 間氨基乙酰苯鹽酸鹽細螺旋體病IgG抗體Elisa
Rummeliibacillus stabekisii 3-甲氧基-5-甲酸卵泡抑樣蛋白1Elisa
黑木耳 D-亮氨酰甘氨酸甲型流感病IgG抗體Elisa
枯草芽孢桿 2-溴-1-甲氧基萘甲型流感病IgM抗體Elisa
華根霉 2-氨基-5-溴-4-羥基嘧啶乙型流感病IgG抗體Elisa
金黃色葡萄球* 順式-3-己烯乳酸酯乙型流感病IgM抗體Elisa
杏鮑菇 3-異酸酯嗅2Elisa
銅綠假單胞(綠膿桿) (R)-(+)-2,2'-聯(lián)[二-(4-基)膦基]-1,1'-聯(lián)萘N-1-甲基煙酰Elisa