產(chǎn)品屬性:
中文名稱:鈣黃綠素AM
英文名稱:Calcein,AM
產(chǎn)品規(guī)格:10μg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
鈣黃綠素AM,是一種應(yīng)用廣泛的綠色熒光細(xì)胞標(biāo)記物。鈣黃綠素AM具有膜透性,共孵育時(shí)可以傳過(guò)細(xì)胞,其本身不具有熒光信號(hào),但在胞內(nèi)被酯酶水解后,生成具有熒光信號(hào)的鈣黃綠素。 在健康的活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中,鈣黃綠素可以保持高負(fù)電荷狀態(tài)。由于其對(duì)細(xì)胞的毒性小,鈣黃綠素AM 已經(jīng)被廣泛用于研究細(xì)胞膜的完整性和長(zhǎng)期示蹤觀察以及活細(xì)胞計(jì)數(shù)。 CAS:148504-34-1 分子式:C46H46N2O23 分子量:994.86 儲(chǔ)存:-20℃,避光,有效期12個(gè)月 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
車前草苷D英文名稱: 1-Naphthalene ethanol核仁纖維蛋白抗體包裝1g
車前子(車前)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Naphthyl acetate鐵蛋白輕鏈抗體包裝250mg
車葉草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Octacosanol肝核因子3抗體包裝5g
沉香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Phenyl-1H-tetrazole-5-thiol果糖1,6-二磷酯抗體包裝100g
沉香四英文名稱: 2,2-Dimethyl-1,3-propanediol6磷果糖激抗體包裝1g
陳皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2,2-Dimethylsuccinic acid肌肉果糖二磷抗體包裝5g
陳皮炭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2,7-Dihydroxynaphthalene纖維蛋白原γ鏈抗體包裝5g
橙黃決明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2,6-Dichloroquinone-4-chlorimide纖維蛋白肽B抗體(血纖肽B)包裝100ml
橙皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Adamantanol原癌基因c FGR抗體包裝100ml
橙皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Adamantanone肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體包裝500ml
橙皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Bromonaphthalene磷化肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體包裝100g
匙羹藤苷元英文名稱: 2-Chloroacetamide纖連蛋白2抗體包裝25g
匙羹藤新苷元英文名稱: 2-Chloroethanesulfonic acid sodium salt纖連蛋白7抗體包裝5g
匙羹藤葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2'-Deoxyinosine-5'-monophosphate sodium salt彈性蛋白結(jié)合蛋白Fcn2抗體包裝10MG
匙羹藤皂苷C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Ethoxybenzaldehyde范可尼綜合征相關(guān)蛋白FAN1抗體包裝1g
巴氏醋桿菌Acetobacter│pasteurianus 質(zhì)量規(guī)格:純度≥99.0%,含量≥98.5%生長(zhǎng)分化因子15試劑盒七葉膽苷IX;
惡臭假單胞菌Pseudomonas│putida 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子試劑盒去檳榔次堿;Guvacine hydr
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥99%腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物試劑盒青蒿乙;Arteannuin
鈣黃綠素AMChromohalobacter 顏料黃1KL-7Elisa
宓花豆根瘤 2-氯-5-溴甲酯抗M3D受體抗體Elisa
塔賓曲霉 4-甲基-5-甲酸基-1,3-惡唑熱休克蛋白27Elisa
傘枝犁頭霉 鹽酸安他唑啉酪氨酸激Elisa
柱形矛束霉 7-羥基-5-甲基-1,3,4-三氮利磷酸化HER2蛋白Elisa
水生拉恩氏 2-溴-5-氯-1,3-二氟苯膜聯(lián)蛋白ⅡIgG抗體Elisa
糞產(chǎn)堿桿 3-氯-5-氟膜聯(lián)蛋白ⅡIgM抗體Elisa
科氏芽孢桿(可訂購(gòu)) 對(duì)氯苯乙酰氯Mac-2結(jié)合蛋白糖基化異構(gòu)體Elisa
樟疫霉 蘆丁三水合物白喉抗體Elisa
鏈格孢 烯酸己酯載脂運(yùn)載蛋白-2Elisa
冬蟲(chóng)夏草(冬蟲(chóng)夏草,蝙蝠蛾被毛孢,中國(guó)被毛孢) 4-氨基苯甲脒過(guò)氧化物1Elisa
三葉草根瘤 5-溴-2-氟腺病7型IgG抗體Elisa
棘孢小單孢 (E)-乙酸-2-己烯酯腺病7型IgM抗體Elisa
楊生盤(pán)二孢 3-溴-4-T白血病1+2型病Elisa
地衣芽孢桿 3-溴-4-甲酯ATP合成Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)