化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
商品介紹：
本品為IV型膠原酶，≥125 CDU/mg solid（CDU = collagen digestion units），特別適用于胰島組織的消化。 本品來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶，多糖酶，脂酶等，分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。 膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。 目前商業(yè)化提供的細菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應用上有所偏向： 1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備； 2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的制備； 3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細胞的制備； 4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。 酶活力單位定義 在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當于1μM L-亮氨酸的酶量定義為1個酶活力單位。 儲存條件：4℃避光，有效期兩年 |
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：膠原酶IV型
英文名稱：Collagenase IV
產(chǎn)品規(guī)格：100mg
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調(diào)控；
⑤細胞分化及其調(diào)控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
嗎啉惡（標準品）英文名稱： Caffeic acid磷化巨噬集落激因子受體抗體包裝5g
嗎貝(標準品)英文名稱： Caffeic acid微管結(jié)合蛋白CYLD抗體包裝100g
嗎替麥考酚酯/霉酚酯（標準品）英文名稱： Caffeic acid磷化微管結(jié)合蛋白CYLD抗體包裝25g
麥白霉（標準品）英文名稱： Neomycin sulfate磷化CBX5抗體包裝5g
麥迪霉（標準品）英文名稱： Neomycin sulfate霉抗體包裝100mg
麥芽三糖(標準品)英文名稱： Diphenhydramine hydrochloride磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
麥芽糖（標準品）英文名稱： Diphenhydramine hydrochloride磷化質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體包裝500mg
沒食子乙酯(標準品)英文名稱： Polyinosinic acid磷化周期依賴激2抗體包裝100g
霉酚; 麥考酚（標準品）英文名稱： Mildronate,Meldonium磷化分裂周期蛋白25C抗體包裝25g
美(標準品)英文名稱： Mildronate,Meldonium磷化周期依賴性激2抗體包裝5g
美羅培南(標準品)英文名稱： Carrageenan質(zhì)膜微囊蛋白-3抗體包裝25g
美洛西林鈉(標準品)英文名稱： Pranlukast3號染色體開放閱讀框34抗體包裝5g
美洛昔康（標準品）英文名稱： Metoprolol tartrateCD134抗體包裝1g
美索巴莫（標準品）英文名稱： Metoprolol tartrate單核趨化蛋白5抗體包裝5g
美他多辛（標準品）英文名稱： Arabic gum髓鞘相關(guān)糖蛋白CD57抗體包裝100g
優(yōu)雅食烷菌Alcanivorax│venustensis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品色C-1試劑盒甜菊糖;Stevioside
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR色b561試劑盒特女貞苷;Specnuezhenide
假單胞菌屬Pseudomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品絨毛蛋白/埃茲蛋白試劑盒β-蛻皮激;Hydroxyecdyso
膠原酶IV型黃桿 3-羥基異惡唑-5-甲酸甲酯凝血因子ⅡaElisa
小孢根霉原變種 水合乙酸鋱(III), REacton髓樣分化蛋白2Elisa
中慢生根瘤 過氧化單硫酸鹽五型腺病抗原Elisa
溜曲霉 4,6-二氨基-2-甲硫基嘧啶破傷風類IgG抗體Elisa
多孢木霉 氟化釩(IV)糖蛋白95Elisa
蘇云金芽胞桿 三氟釩肝結(jié)合性表皮生長因子Elisa
臭曲霉 磷酸鉍(III)腦紅蛋白Elisa
小橢圓接合酵母 N,2-二甲基-3,3-二苯基-2-脂Elisa
歧皺青霉 2-巰基-4-氨基-6-羥基嘧啶抵抗樣分子βElisa
葉球鞘氨單胞 3-硝基-4-羥乙氨苯旋毛蟲抗體Elisa
谷氨酸棒桿 環(huán)基萘啶羧酸血小板反應蛋白2Elisa
干酪乳桿 2-基噻吩胰島抗原2Elisa
假單胞屬 異戊酸己酯抗甲狀腺過氧化物抗體Elisa
微球 硫酸銪(III)十水合物, REacton甲狀腺球蛋白抗體Elisa
蘇云金芽孢桿松蠋亞種 硝酸鏑(III) 水合物抗磷脂抗體Elisa
化工儀器網(wǎng)