詳細(xì)介紹
商品介紹:
本產(chǎn)品是葡聚糖Ficoll 400與泛影酸葡甲胺按照一定比例混合的無菌水溶液,適用于從人外周血液中分離淋巴細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞密度的差異,采用密度梯度沉降法,借助細(xì)胞分離液和離心技術(shù),就可以進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離純化。 保存溫度:18-25℃避光 應(yīng)用: 外周血單個核細(xì)胞(PBMC)的分離 產(chǎn)品特性: GMP級環(huán)境 無細(xì)胞毒性,細(xì)胞得率高 活力更好 批次差異極小 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
200ml | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
美他環(huán),烯土霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amlodipine角蛋白13抗體包裝25g
美托拉宗(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amlodipine白免疫球蛋白樣受體-B抗體包裝500g
美雄諾龍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: NizatidineCD33L抗體包裝100g
門冬胰島(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Carboxymethyl cellulose 角蛋白10抗體包裝25g
蒙脫石(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fludarabine軸突生長因子CD108抗體包裝5g
孟魯司特鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fludarabine唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集5抗體包裝1g
咪喹莫特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: G-418 disulfate,GeneticinCD329抗體包裝1g
咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Erlotinib嗜粒趨化蛋白14抗體包裝1g
咪唑煙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-Acetyl-cysteine1號染色體開放閱讀框57抗體包裝250mg
米格列(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Zopiclone2號染色體開放閱讀框18抗體包裝100ml
米格列奈鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Zopiclone色c氧化6抗體包裝100g
米力農(nóng)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aniracetam嗜粒趨化蛋白24抗體包裝25g
米諾地爾(硫鹽)敏樂啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aniracetam巨噬炎性蛋白15包裝100ml
米屈肼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Glutamine巨噬炎性蛋白抗體包裝500ml
米替福新(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: RoflumilastCD72蛋白抗體包裝1g
擬青霉屬Paecilomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>720IU/MG,BR膜DNA抗體試劑盒1-脫氧野尻霉;1-Deoxynoji
醋化醋桿菌Acetobacter│aceti 質(zhì)量規(guī)格:效價測定角蛋白21-1片段試劑盒他克莫司;Tacrolimus
肺炎克雷伯氏菌Klebsiella│pneumoniae 質(zhì)量規(guī)格:EP/USP角蛋白18-M65試劑盒10-脫乙?;涂ǘII;10-Dea
PBMC樣本密度分離液飼料 鉛 硬脂酸鈷風(fēng)疹病IgM抗體Elisa
南方散斑殼 啉鹽酸鹽抗組織轉(zhuǎn)谷氨酰IgG抗體Elisa
枯草芽孢桿 1,3,4,6-四-O-乙?;?2-脫氧-2-苯二甲酰亞氨基-β-D-吡喃葡萄糖抗組織轉(zhuǎn)谷氨酰IgM抗體Elisa
異常漢遜酵母異常變種 氮雜環(huán)丁烷-3-甲酸甲酯鹽酸鹽糖原磷酸化aElisa
冠突散囊 1,4-二異基苯硫氧還蛋白氧化還原Elisa
大腸埃希氏 三氟乙酰賴氨酸骨硬化蛋白Elisa
赤曲霉 乙烯基雙茚基二氯化鋯, 外消旋混合物肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體Elisa
橢圓孫秀芹氏 3-氨基-5-苯基噻吩-2-甲酸甲酯活化轉(zhuǎn)錄因子3Elisa
雙胞雙鐮孢 氧化白藜蘆半胱氨酸蛋白1Elisa
桃色枝頂孢 扁豆堿卡格氏病Elisa
松針散斑殼 L-谷氨酸 1-甲酯麥角蛋白IgG抗體Elisa
同絲毛殼 白皮杉水痘-帶狀皰疹病IgA抗體Elisa
釀酒酵母 白藜蘆抗組織轉(zhuǎn)谷氨酰IgA抗體Elisa
貴州青霉 美曲勃龍(R-1881)糖原磷酸化Elisa
考克氏屬 尼泊金異酯α半乳糖苷Elisa