商品介紹:
用途:抗酸菌(諾卡菌和紅球菌等)染色,可鑒別抗酸菌與非抗酸菌 注意事項(xiàng): 熒光顯微鏡下抗酸菌呈亮黃色,非抗酸桿菌和背景呈暗黃色。主要由金胺O-羅丹明染色液、脫色液、復(fù)染液組成。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
依諾肝鈉英文名稱: Tin (II) oxalate蛋白酪磷H1抗體包裝25g
依曲替酯;A酯英文名稱: Tin (IV) oxide磷化磷脂酰肌激催化亞單位D抗體包裝5g
依曲韋林英文名稱: Titanium (III) sulfate磷化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體包裝1g
依替膦鈉英文名稱: Titanium (IV) sulfate穿孔抗體包裝250mg
*度英文名稱: Tributyl citratePALM3抗體包裝100g
*英文名稱: Tris(bathophenanthrolinedisulfonate)ruthenium(II) sodium salt solution芳香酯1(對(duì)氧磷)抗體包裝25g
乙嘧啶英文名稱: Trypsinogen >2500U/mg from bovine pancreas磷吡哆氧化抗體包裝100g
乙昔羅鈉英文名稱: Tryptamine磷化蛋白激C抗體包裝25g
異丁司特英文名稱: Tungsten (VI) oxide磷化蛋白激C抗體包裝500g
吲達(dá)帕英文名稱: Tungsten carbide-200磷化腫瘤抑制基因PTEN抗體包裝1g
美辛英文名稱: Tungsten powder磷化磷脂酰肌激催化亞單位A抗體包裝250mg
右旋蘭索拉唑英文名稱: Tungstic (VI) acid磷化磷脂酰肌激抗體包裝100g
右旋洛芬英文名稱: Verruculogen from Penicillium verruculosum磷化磷脂酰肌激抗體包裝25g
右旋洛芬丁三英文名稱: Wool fat磷化蛋白激C抗體包裝5g
右佐匹克英文名稱: X-GLUC, sodium salt磷化蛋白激C抗體包裝25g
熒光假單胞菌Pseudomonas│fluorescens 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白3試劑盒黃芪苷(黃芪皂苷IV)-對(duì)照品;有報(bào)告
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白12試劑盒雷公藤(雷公藤內(nèi)酯)-對(duì)照品;有報(bào)
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白10試劑盒野百合堿(豬屎豆堿)-對(duì)照品;有報(bào)告
抗酸染色液(金胺O-羅丹明熒光法)枯草芽胞桿 3-氨基-4-氟甲酯ERp57Elisa
枯草芽孢桿 2-氟脂褐Elisa
大孢鏈霉 5-降烯-2,3-二羧酸一甲酯心型脂肪酸結(jié)合蛋白Elisa
近弧狀短波單胞 鉛(II)BPDE-DNA加合物Elisa
根瘤 1--3-乙氧基烷周期依賴性激2Elisa
秦氏蜜環(huán) 順-4-氨基環(huán)己烷甲酸可溶性β淀粉樣蛋白Elisa
鏈球?qū)?/span> 4-氨基-3-溴喹啉不可溶性β淀粉樣蛋白Elisa
艱難鏈霉 3-氧代-3,4-二氫-2-喹喔啉甲酸乙酯雷帕霉靶蛋白Elisa
紅球 4-氨基鄰苯二甲酰亞單氧化BElisa
大腸埃希 4-氟-1,2-苯二腸道病71型IgG抗體Elisa
唐菖蒲伯克霍爾德氏 6--1,2,3,4-四氫咔唑蛋白酪氨酸磷酸抗體Elisa
尾孢屬 2--3,5-二氟苯甘油磷酸Elisa
釀酒酵母 3-氨基-5-甲基己酸過(guò)氧化氫Elisa
小鏈霉(小諾卡氏) N-(2,3,4-三氟苯)乙酰苯抗雙鏈DNA-IgG抗體Elisa
總狀橫梗霉 陽(yáng)離子桃紅FG抗雙鏈DNA-IgM抗體Elisa