以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
用途: 組織脫鈣液 注意事項: 主要由甲酸溶液、檸檬酸鈉溶液組成,臨時前等量混合。 儲存條件:室溫,12個月 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
哈巴苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TetracyclineKLHDC8A蛋白抗體包裝25g
海風(fēng)藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethylhydrocupreine HCl,Optochin HCl硫角質(zhì)抗體包裝5g
海金沙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Moxidectin 腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子13包裝1g
??略碥赵?/span>(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Moxidectin 鋅指蛋白103抗體包裝5g
海龍(尖海龍)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amrinone纖維母生長因子7抗體包裝1g
海南冬青苷D英文名稱: Amrinone肺Kruppel樣因子抗體包裝5g
海星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Carrageenan激肽釋放5抗體包裝100mg
海堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Taurocholate-3-sulfate,disodium salt 激肽釋放13抗體包裝50mg
亥茅酚苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: FLAG peptide激肽釋放15抗體包裝5g
漢黃芩苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Zinc undecylenate激肽釋放2抗體包裝25g
漢黃芩(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: lupanine 激肽釋放12抗體包裝5g
漢桃葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Prulifloxacin G蛋白偶聯(lián)受體54抗體包裝25g
旱蓮苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Prulifloxacin 驅(qū)動蛋白家族KIF17抗體包裝5g
旱蓮苷D英文名稱: 5-HIAA轉(zhuǎn)錄因子KLF9抗體包裝100mg
蒿本內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cefodizime acid上皮特異性蛋白1抗體包裝5MG
蘇云金芽胞桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:≥97%,BR抗線粒體抗體M2亞型試劑盒甘草二銨;Diammonium gly
弗氏鏈霉菌Streptomyces│fradiae 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR抗線粒體抗體試劑盒甘露;Mannitol
青銅小單孢菌Micromonospora│chalcea 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品抗紋狀體試劑盒甘;Glycine
AFIP甲酸-檸檬酸液鐘器腐霉 O-芐基-DL-絲氨酸蛋白質(zhì)羰基Elisa
嗜熱脂環(huán)酸芽胞桿 2-溴辛酸甲酯乙酰酯Elisa
鬼傘 3-基-4-甲基吡啶生物羧化Elisa
黑曲霉 2-氯-4-羥基苯甲轉(zhuǎn)羧基Elisa
灰葡萄孢(灰霉?。?/span> 4-乙氧羰基-3,5-二甲基吡咯-2-羧酸β-酮酰-ACP合IIElisa
甲基桿屬 R-四氫堿鹽酸鹽β-酮酰-ACP合IElisa
溶血隱秘桿 4-戊基環(huán)己(順反異構(gòu)體混合物)磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯Elisa
尖鐮孢古巴專化型 2-溴-4-三氟甲基硫酰氯羧基轉(zhuǎn)移β亞基Elisa
蟻巢傘屬 2-氨基-2-苯基丁酸蛋白磷酸脂Elisa
噬尼古丁節(jié)桿 乙?;阴籽趸溅赂事毒厶荅lisa
紅冬孢鎖擲孢酵母 4-(2-氯乙氧基)苯甲淀粉去分支Elisa
根瘤 異硫酸乙酯溶Elisa
臭曲霉 S-羧乙基異硫脲氯化物赤霉4+7Elisa
釀酒酵母 3-苯甲酰基吡啶腺苷二磷酸焦磷酸化Elisa
大麗花輪枝孢(棉花黃萎?。?/span> 3-氯-2-硝基吡啶三酰甘油Elisa