以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
用途: 用于顯示未經(jīng)脫鈣處理的冰凍、石蠟包埋組織及培養(yǎng)的細(xì)胞中的鈣鹽染色。 注意事項: 又稱Dahl茜素紅法,鈣沉積物成橘紅色,染色時間取決于鈣的含量,檢測少量鈣時更有效。復(fù)染液為固綠。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
水稻黃單胞菌(水稻白葉枯菌)*癌相關(guān)蛋白1抗體Human GABRA3 ELISA Kit小鼠8異前列腺F2α(8-iso-PGF2a)免疫試劑盒
金霉鏈霉菌Bcl2樣凋亡蛋白9抗體Human GABRB1 ELISA Kit小鼠8異前列腺(8-iso-PG)免疫試劑盒
巨獸芽孢桿菌BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體Human GABRD ELISA Kit小鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)免疫試劑盒
三葉草根瘤菌BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體Human GABRG1 ELISA Kit小鼠6前列腺F1a(6-keto-PGF1a)免疫試劑盒
香菇BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白19抗體Human GABRG2 ELISA Kit小鼠6前列腺(6-K-PG)免疫試劑盒
大麗輪枝霉BXDC2蛋白抗體Human GADD34 ELISA Kit小鼠5羥色受體2A(5-HTR 2A)免疫試劑盒
長根小奧德蘑BOLA1蛋白抗體Human GAB3 ELISA Kit小鼠5羥色(5-HT)免疫試劑盒
里拉微球菌BOLA2蛋白抗體Human GADD45A ELISA Kit小鼠5羥基乙(5-HIAA)免疫試劑盒
釀酒酵母殺菌通透性增加蛋白樣1抗體Human GABARAP ELISA Kit小鼠5羥二十碳四烯(5-HETE)免疫試劑盒
擬莖點霉殺菌/通透性增加蛋白樣2抗體Human GABARAPL1 ELISA Kit小鼠5核苷(5-NT)免疫試劑盒
長鹽土生古菌嗜乳脂蛋白樣3抗體Human GABPB2 ELISA Kit小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌殺菌/通透性增加蛋白樣3抗體Human FXYD6 ELISA Kit小鼠4-羥基壬烯(HNE)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種BRD1蛋白抗體Human GABARAPL2 ELISA Kit小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)免疫試劑盒
蟹枝毛殼BRPF3蛋白抗體Human FXYD4 ELISA Kit小鼠Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢNT)免疫試劑盒
矮小傘枝霉BXDC1蛋白抗體Human FXYD3 ELISA Kit小鼠Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)免疫試劑盒
蘇云金芽胞桿菌多窩亞種腦蛋白44抗體Human FXYD7 ELISA Kit小鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒
黃海芽孢桿菌Bacillus│marisflavi 質(zhì)量規(guī)格:>96%,BRαS轉(zhuǎn)移試劑盒1-羥基-2,3,4,7-四氧基山山
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRα干擾試劑盒去基川陳皮
香魚假單胞菌Pseudomonas│plecoglossicida 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRα-輔肌動蛋白4試劑盒芹菜-7-O-葡萄糖苷
鈣鹽染色液(茜素紅S法)布魯氏 生物Ⅱ型 3,3-二甲基-4-戊烯酸甲酯Tau蛋白Elisa
盤長孢狀盤孢 貝丁酯Toll樣受體2Elisa
副豬嗜血桿 3--4-氨基吡唑鹽酸鹽Toll樣受體4Elisa
粉紅單端孢霉 6-甲氧基-2-(4-甲氧苯基)苯并噻吩Toll樣受體9Elisa
Oerskovia enterophila 2-噻吩甲T亞群Elisa
意大利酵母 4-羥基間苯二甲酸V型ATPElisa
布魯氏 生物Ⅴ型 2-溴-5-甲氧基WNT抑制因子1Elisa
金霉鏈霉(生金色鏈霉) 5-溴-2-甲氧基苯α1酸性糖蛋白Elisa
無 2-氨基-4--5-酚α1-微球蛋白Elisa
圓酵母屬 2--5-氨基α7型神經(jīng)煙堿能受體Elisa
白色彎曲嗜酸 4--5-嘧啶αL巖藻糖苷Elisa
赤霉屬 3-甲氧基羰基苯磺酰α-氨基羥甲基惡唑酸Elisa
大腸埃希氏 2-氨基-5-α淀粉Elisa
枝狀枝孢 6-庚炔α-防御Elisa
節(jié)桿 2,5-二氫吡咯鹽酸鹽α干擾Elisa