產(chǎn)品屬性:
中文名稱:XTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑
英文名稱:XTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Kit
產(chǎn)品規(guī)格:500T|1000T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
XTT(二甲氧唑黃)是一種類似于MTT 的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,活細胞線粒體中存在與輔酶Ⅱ相關(guān)的脫氫酶,可將黃色的XTT 還原成水溶性的橘黃色的甲臜。生成的甲月贊能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,不形成顆粒,可直接用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測定吸光值。 操作方法 1. 96 孔板加入細胞100μL/孔(約1×104),置37℃ 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時。2.加入適當(dāng)濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃,含5% CO2 空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4. 向各孔中加入50 μl 的XTT 檢測工作液。 5. 37℃下孵育1~4 小時。 6. 酶標(biāo)儀在450nm 波長處檢測每孔的光密度。 結(jié)果分析 1. 細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加XTT 工作液,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加XTT 工作液,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 2. 求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。 |
細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
III型前膠原基末端肽(PⅢNP)英文名稱:PⅢNP ELISA KitBcl2相互作用蛋白1抗體(轉(zhuǎn)化相關(guān)基因8蛋白)包裝100g
G蛋白偶聯(lián)膽汁受體1(GPBAR1)英文名稱:GPBAR1 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白5抗體包裝25g
GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)英文名稱:GATA4 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白15抗體包裝1g
FMS樣酪激3配體(Flt3L)英文名稱:Flt3L ELISA KitBcl-2樣蛋白2抗體包裝250mg
FMS樣酪激3(Flt3)英文名稱:Flt3 ELISA Kit殺菌/通透性增強蛋白抗體包裝5g
FAM84A蛋白(FAM84A)英文名稱:FAM84A ELISA KitBcl-2抗體包裝25g
FAM172A蛋白(FAM172A)英文名稱:FAM172A ELISA Kit腦轉(zhuǎn)錄因子4蛋白抗體包裝5g
E選擇(E-Selectin/CD62E)英文名稱:E-Selectin/CD62E ELISA Kit膽鹽激活脂肪抗體包裝1mg
E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)英文名稱:E-Cad ELISA Kit3-羥丁脫氫抗體包裝25g
E3泛蛋白連接TRIM68(TRIM68)英文名稱:TRIM68 ELISA Kit長鏈脂肪酰基解抗體包裝5g
D-乳脫氫(D-LDH)英文名稱:D-LDH ELISA Kit磷化癌易感基因1抗體包裝10mg
D二聚體(D2D)英文名稱:D2D ELISA Kit磷化β分泌抗體包裝50mg
DNA(胞嘧啶-5)基轉(zhuǎn)移3B(DNMT3B)英文名稱:DNMT3B ELISA Kit磷化相關(guān)死亡促進因子抗體包裝1g
DNA(胞嘧啶-5)基轉(zhuǎn)移3A(DNMT3A)英文名稱:DNMT3A ELISA Kit磷化相關(guān)死亡促進因子抗體包裝25g
DNA(胞嘧啶-5)基轉(zhuǎn)移1(DNMT1)英文名稱:DNMT1 ELISA Kit磷化Bcl-2抗體包裝5g
芳香乙酰脫乙?;鶚拥鞍?/span>2抗體肝核因子1β(HNF1β)LCL161 is an orally bioavailable second mitochondrial-derived activator of caspa
XTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑ATCC 10211 氧基硅醌氧化還原酶1檢測試劑盒
斜頂 4-二基丁縮二甲賴氨酰氧化酶檢測試劑盒
相思根瘤 2-(基硅基)噻吩酪氨酸蛋白激酶檢測試劑盒
聚貪氏 3,5-二叔丁基水楊酸酪氨酸蛋白激酶受體A2檢測試劑盒
枯草芽孢桿 對甲草酸二酯酪氨酸蛋白激酶受體A7抗體檢測試劑盒
Nocardioides 4-乙氧基-1-萘甲酸酪氨酸激酶檢測試劑盒
非脫羧勒克 N-叔丁氧羰基-5-溴酪氨酸激酶2檢測試劑盒
枯草芽孢桿 2,8-二甲基-2,3,4,5-四氫-1H-吡啶并[4,3-b]酪氨酸激酶受體檢測試劑盒
球孢白僵 6-羥基吡啶-2-羧酸酪氨酸酶檢測試劑盒
赭色擲孢酵母 9,9-二辛基芴-2,7-雙(酸頻哪酯)酪氨酸羥化酶檢測試劑盒
釀酒酵母 N-環(huán)戊基甘氨酸甲酯鹽酸鹽酪氨酰DNA 磷酸二酯酶1檢測試劑盒
美澳型核果褐腐病 鄰芐氧苯酪酪肽;多肽YY檢測試劑盒
耶納農(nóng)球 4,6-二甲基-2-庚酮雷帕霉素靶蛋白檢測試劑盒
枯草芽孢桿 3,4-二羥基噻吩-2,5-二羧酸二乙酯類白抗原C檢測試劑盒
Bacillus tequilensis 4-氯-3-甲基吡啶鹽酸鹽
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)