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詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
DiOC18(3) | 10mg | 1～3天 |
商品介紹：
本探針是常用的細胞膜熒光探針之一，呈現(xiàn)綠色熒光。DiO是一種親脂性膜染料，進入細胞膜后可以側向擴散逐漸使整個細胞的細胞膜被染色。DiO在進入細胞膜之前熒光非常弱，僅當進入到細胞膜后才可以被激發(fā)出很強的熒光。DiO被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，DiO和磷酯雙層膜結合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。其中，大激發(fā)波長為484nm，大發(fā)射波長為501nm。 CAS：34215-57-1 分子式：C53H85ClN2O6 分子量：881.72 DiO可以溶解于無水乙醇、DMSO和DMF，溶解度約為1-2.5mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當加熱，并用超聲處理以促進溶解。 DiO被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。DiO通常不會明顯影響細胞的生存力(viability)。DiO對于細胞膜染色的熒光強度通常要低于DiI，有時對于某些經(jīng)過固定的組織的染色效果欠佳。 DiO除了簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。 用于細胞膜熒光標記時，DiO的常用濃度為1-30μM，常用的濃度為5-10μM。DiO可以直接染色活的細胞或組織，染色時間通常為5-20分鐘。對于固定的細胞或組織，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚進行固定，使用其它不適當?shù)墓潭ㄒ簳е聼晒獗尘拜^高。 注意事項：熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 儲存條件：4℃避光，有效期一年。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
無磷二氫鈉（標準品）英文名稱： Ambrisentan磷化D酪激衰減蛋白2抗體包裝5g
無磷氫二鈉（標準品）英文名稱： Ambrisentan磷化D酪激衰減蛋白2抗體包裝1g
無味霉A晶型（標準品）英文名稱： Dronedarone HCL膀胱癌缺失基因1包裝1g
無味霉B晶型（標準品）英文名稱： Dronedarone磷化膀胱癌缺失基因1抗體包裝1g
西吡銨（標準品）英文名稱： Ranolazine HCl多巴受體D4抗體包裝5g
西洛多辛(標準品)英文名稱： Ranolazine HCl橋粒斑蛋白1抗體包裝1g
西米替?。藴势罚┯⑽拿Q： Lercanidipine HCl橋粒斑蛋白2抗體包裝250mg
西尼地平(標準品)英文名稱： Lercanidipine HCl多巴受體D5抗體包裝5g
西沙必利（標準品）英文名稱： Promethazine Hydrochloride脫氧尿嘧啶三磷核苷解抗體包裝1g
西替利雜質A(1-[（4-）基]哌)（標準...英文名稱： Agomelatine多巴受體D3抗體包裝5g
昔萘沙美特羅（標準品）英文名稱： Agomelatine誘捕受體3抗體包裝1g
烯酰嗎啉(標準品)英文名稱： Piracetam多巴轉運蛋白DAT抗體包裝1g
腺嘌呤（標準品）英文名稱： Ramelteon誘捕受體2抗體包裝5g
腺嘌呤核苷（腺苷）（標準品）英文名稱： Lacosamide腫瘤調(diào)亡/死亡受體5抗體包裝1g
腺嘌呤鹽鹽(標準品)英文名稱： Milnacipran 核心蛋白聚糖抗體包裝5g
酵母菌Saccharomyces│sp. 質量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)微管相關蛋白2試劑盒三白草;sauchinone
凍土毛霉Mucor│hiemalis 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品微管相關蛋白1A/1B輕鏈3B試劑盒2-O-alpha-L-鼠李吡喃糖甙鳶尾
青霉屬Penicillium│sp. 質量規(guī)格：>99%,USP,BR,可用于培養(yǎng)微管相關蛋白1A/1B輕鏈3A試劑盒尚含雞納甙;Quinovin
細胞膜綠色熒光探針(DiO)宋內(nèi)氏志賀氏51592 1-(2-甲氧基苯基)哌氫鹽RAR相關孤兒受體γElisa
謝瓦曲霉 2'-溴-4'-氟乙酰苯二肽基肽ⅣElisa
*蜜環(huán) 對羥基苯丁酮抗磷脂IgG抗體Elisa
紫穗槐根瘤 2-羥基環(huán)戊烷羧酸甲酯抗磷脂IgM抗體Elisa
白地霉 3-甲氧苯白抗原FElisa
魯氏不動桿 (R)-(+)-2-芐氧基酸流行性腦膜炎球抗體Elisa
繩狀籃狀 2,3,5-三氯3羧基4甲基5基2呋喃基Elisa
青霉 3-甲基芐人類嗜TⅠ型病IgG抗體Elisa
乳酸乳球乳脂亞種 4,5-二氯-2-甲基噠-3-酮干擾誘導蛋白44Elisa
球孢鏈霉高加索變種 地氯雷他定海藻糖Elisa
產(chǎn)氨短桿 N-甲基環(huán)己酪氨酸蛋白激受體ErbB3Elisa
運動發(fā)酵單胞 5-氮雜-3-甲CD33分子Elisa
杜搟氏 1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷四鹽酸鹽外異蛋白AElisa
豌豆根瘤 1-溴-4,5-二氯-2-（易）核因子紅2相關因子2Elisa
淡紫灰鏈霉 酸鈉一水合物類固17α羥化Elisa
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