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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-21 11:35:07瀏覽次數(shù)：261
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 500T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X9593 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | AlamaBlue Cell Viability Assay Kit |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
AlamaBlue Cell Viability Assay Kit | 500T | 1～3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代 培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：
AlamaBlue 細胞活力檢測試劑盒提供了一種可靠、靈敏、安全和低成本的快速有效檢測細胞活力與毒性的方法。AlamaBlue 通過在細胞生長的培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的化學(xué)還原反應(yīng)，將非熒光信號的染料轉(zhuǎn)換成為一紅色熒光物質(zhì)，試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），從而檢測細胞的存活率。維持細胞需要還原性環(huán)境而抑制生長則表現(xiàn)為氧化型環(huán)境。細胞生長率相關(guān)的降低可表現(xiàn)為氧化還原指示劑從氧化型（非熒光素、紫色）轉(zhuǎn)為還原型（熒光素、紅色）。該熒光信號可以用530~560nm 的激發(fā)波激發(fā)，在590nm 處可以獲發(fā)射波，檢測570 和600nm 的的吸光度值，校正監(jiān)測值，可以減去相應(yīng)的570nm 和600nm 的背景吸光度值。檢測所產(chǎn)生的熒光信號是與樣品中的活細胞數(shù)成正比的。 AlamaBlue 細胞活性檢測試劑盒的靈敏度相似于[3H]胸苷法檢測細胞增殖法。根據(jù)不同類型的細胞，AlamaBlue 可以檢測到至少40個細胞，同時保證很好的重現(xiàn)性和靈敏度。作為試鹵靈（紫紅、紅色熒光）可以進一步被還原為水解化的試鹵靈（無色、無熒光），當細胞數(shù)量增多，所有的刃天青（7-羥基-3-羰基-10-氧化-三氫吩惡嗪）被轉(zhuǎn)換為試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），試劑盒的信號反而會發(fā)生衰減。因此，對于您所用的試劑盒來說，針對不同的細胞類型，應(yīng)該調(diào)整您的細胞數(shù)，做相應(yīng)的優(yōu)化，才能得到更好的結(jié)果。 操作說明 以下操作可用作通用指導(dǎo)建議?？紤]不同細胞類型與培養(yǎng)條件的差異性，有必要根據(jù)實際情況優(yōu)化您的操作步驟。 1. 96 孔細胞培養(yǎng)板每孔100μL 培養(yǎng)基飼養(yǎng)細胞，控制細胞數(shù)目在40~10000 個/貼壁細胞，2000~500000 個/懸浮細胞。設(shè)置空培養(yǎng)基做對照。 2. 加入10μL AlamaBlue 溶液至培養(yǎng)基中，37 度孵育：24 小時（比色法讀數(shù)）；5-6 小時（熒光讀數(shù)）。 3. 檢測570nm 和600nm 的吸光度，或者用熒光微孔板讀數(shù)530nm 激發(fā)，590nm 發(fā)射波讀數(shù)。 4. 如果采用比色法檢測，選擇OD570-OD600 檢測，如果檢測熒光信號，請在校正OD 值后，先設(shè)置標準曲線，選擇合適您實驗的細胞佳濃度。 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)英文名稱：25(OH)D3/25 HVD3 ELISA KitBcl2樣凋亡蛋白14抗體包裝5g
25羥基維生D3(25 HVD3)英文名稱：25 HVD3 ELISA KitBcl2蛋白修飾因子抗體包裝1g
25羥基膽固(25-OHC)英文名稱：25-OHC ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體包裝5g
20S蛋白體(20SP)英文名稱：20SP ELISA KitBCL2樣15促凋亡蛋白抗體包裝25g
17-類固(17-KS)英文名稱：17-KS ELISA Kit骨堿性磷抗體包裝100g
17羥孕(17-OHP)英文名稱：17-OHP ELISA Kit磷化T淋巴連接蛋白抗體包裝25g
17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)英文名稱：17-OHCS ELISA Kit磷化T淋巴連接蛋白抗體包裝500g
17-α睪(17-αMT)英文名稱：17-αMT ELISA Kit腦納前體抗體包裝10MG
16α羥基雌1(16-α OHE-1)英文名稱：16-α OHE-1 ELISA Kit腦納前體抗體包裝100mL
15脂加氧(15-LO/LOX)英文名稱：15-LO/LOX ELISA Kit骨髓基質(zhì)干抗原1抗體包裝25mL
12羥二十烷四烯(12-HETE)英文名稱：12-HETE ELISA Kit磷化蛋白酪激ATK抗體包裝1g
1,4,5-三磷肌(IP3)英文名稱：IP3 ELISA Kit磷化蛋白酪激ATK抗體包裝5g
1,3-βD葡葡糖苷(1,3-βD-Glu)英文名稱：1,3-βD-Glu ELISA Kit磷化相關(guān)死亡促進因子抗體包裝100ml
1,25二羥基維生D3(1,25 DHVD3)英文名稱：1,25 DHVD3 ELISA Kit磷化死亡調(diào)解子抗體包裝1g
組織蛋白B(CTSB)英文名稱：CTSB ELISA Kit磷化死亡調(diào)解子抗體包裝250mg
甘油酯激線粒體抗體基質(zhì)金屬蛋白3(MMP3)PTZ-343 is a phenothiazine derivative with chemical name: sodium 3-(10H-phenothi
Alarma Blue細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒果形正青霉 檸檬酸甜菜堿麻疹病IgG抗體檢測試劑盒
假結(jié)核耶爾森氏 4-頻哪酯毛球族同族體1檢測試劑盒
土地桿 3,5-二氟-4-氯溴苯毛球族同族體2檢測試劑盒
哈茨木霉 4-甲氧基苯基酸頻那酯毛球族同族體3檢測試劑盒
曲霉 4-基-3-氟門冬氨酸檢測試劑盒
美澳型核果褐腐病 1,8-二溴萘門冬酰檢測試劑盒
腐皮殼 3,4,5-三溴吡唑錳超氧化物歧化酶檢測試劑盒
綠色素鏈霉 2-氟-5-吡啶球蛋白A檢測試劑盒
微小桿 5-氯靛紅球蛋白A1檢測試劑盒
靈芝 4-溴-2-甲氧基芐球蛋白D檢測試劑盒
水溶性非食用色素快速篩查盒 3,5-雙(叔丁基)苯甲球蛋白E檢測試劑盒
蟬擬青霉 2-氟-4-酸球蛋白E Fc段受體Ⅰ檢測試劑盒
高地芽孢桿 2-基-4-硝基-6-溴苯球蛋白G檢測試劑盒
平菇 (S)-(-)-b-乙球蛋白G1檢測試劑盒
蠟樣芽孢桿 反式-肉桂酰氯球蛋白G2檢測試劑盒
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