以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
用途: 血液和細(xì)胞涂片、細(xì)菌、染色體顯帶、原生動物寄生蟲等染色 注意事項: 含磷酸鹽緩沖液,等量混合后使用。對胞質(zhì)染色較好,主要成分為瑞氏色素。 儲存條件:室溫,避光,24個月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
巨大芽胞桿菌自噬相關(guān)蛋白18抗體Human MARVELD3 ELISA Kit豬白介22(IL-22)免疫試劑盒
杏鮑菇自噬相關(guān)蛋白4A抗體Human MAS1L ELISA Kit豬白介2(IL-2)免疫試劑盒
鮮綠青霉載脂蛋白A4抗體Human MAST1 ELISA Kit豬白介1受體拮抗劑(IL1Ra)免疫試劑盒
芽孢桿菌12脂氧合抗體Human MAST3 ELISA Kit豬白介1β (IL-1β)免疫試劑盒
血紅紅曲菌血管緊張III抗體Human C10orf58(Redox-regulatory protein FAM213A) ELISA Kit豬白介1α(IL-1α)免疫試劑盒
乳桿菌屬腺苷環(huán)化3抗體Human NY-ESO-1(Cancer/testis antigen 1) ELISA Kit豬白介18(IL-18)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種血管動蛋白抗體Human Caspase 12 ELISA Kit豬白介17(IL-17)免疫試劑盒
水稻漢納酵母腺病早期E1A蛋白抗體Human CD320 ELISA Kit豬白介15(IL-15)免疫試劑盒
球形賴芽孢桿菌磷化活化復(fù)制因子2抗體Human C1orf31(Cytochrome c oxidase assembly factor 6 homolog) ELISA Kit豬白介13(IL-13)免疫試劑盒
Aureimonas pseudogalii磷化活化復(fù)制因子2抗體Human TMPRSS15(Enteropeptidase) ELISA Kit豬白介12(IL-12/P70)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌磷化失調(diào)癥蛋白1抗體Human SPAST(Spastin) ELISA Kit豬白介12(IL-12/P40)免疫試劑盒
香菇錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體Human MLKL(mixed lineage kinase domain-like) ELISA Kit豬白介10(IL-10)免疫試劑盒
果生假絲酵母胞質(zhì)乙脫氫1抗體Human TOM20(translocase of outer mitochondrial membrane 20 homolog) ELISA Kit豬白介1(IL-1)免疫試劑盒
天藍(lán)色鏈霉菌ADP核糖基化樣因子ARL3抗體Human HSD3B7(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 7) ELISA Kit豬白蛋白免疫試劑盒
三葉草根瘤菌花生四烯15脂氧合1抗體Human MVK(Mevalonate kinase) ELISA Kit豬γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒
解幾丁質(zhì)纖維單胞菌癌增強(qiáng)蛋白2抗體Human CD97(CD97 antigen) ELISA Kit豬γ淀粉(AMY)免疫試劑盒
羅伊赫海源菌Idiomarina│loihiensis 質(zhì)量規(guī)格:比活度:>5000 U/mg,BC烯試劑盒鹽
硫色曲霉Aspergillus│sulphureus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,植物激級脫氫E1試劑盒乙氧基血根堿
青霉屬Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,BR激R型同工試劑盒遠(yuǎn)華蟾蜍精
邁格林華染色液(May-Grunwald Stain)仁果殼小圓孢 苯并呋喃-3-酸弓形蟲IgM抗體Elisa
嗜熱脂肪地芽孢桿 2-氨基-3-甲氧基酪蛋白Elisa
耐寒短桿 反式-(1R,2R)-2-氨基環(huán)戊鹽酸鹽a膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子Elisa
黑曲霉 2,4-二-5-基嘧啶b膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子Elisa
西宮皮生球 3-甲基-1H-吲唑乙型肝炎病表面IgG抗體Elisa
阿魏側(cè)耳 3,3'-雙噻吩絡(luò)絲蛋白Elisa
枯草芽孢桿 N,1-雙(叔丁氧羰基)-L-組氨酸雙環(huán)己鹽抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體Elisa
蘇云金芽孢桿 2-甲基-5-甲氧基反神經(jīng)調(diào)節(jié)苷脂抗體Elisa
佛雷德里克斯堡假單胞 2-氨基嘧啶-5-羧酸神經(jīng)節(jié)苷脂Elisa
單胞屬 *貝特6-磷酸果糖激-1Elisa
灰略紅鏈霉 甲基-4,6-O-亞芐基-Α-D-吡喃葡糖苷II型膠原蛋白Elisa
大腸埃希氏 3,5-二羥基苯甲酰肥大蛋白Elisa
草菇 2-氨基-3--5-26S蛋白體Elisa
禿裸鏈霉 O-乙基異脲鹽酸鹽嗜酸性粒過氧化物Elisa
Actinokineospora 2-二苯并[b,f][1,4]氧氮雜卓-11(10H)-酮凝血因子ⅡElisa