詳細介紹
商品介紹:
用途: 尿沉渣染色檢查 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
50ml|100ml | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
野菊花(標準品)英文名稱: D-Tyrosine磷化HER4抗體包裝25g
野馬追(標準品)英文名稱: D-Histidine糖蛋白β-1B抗體包裝500g
野馬追內(nèi)酯A(標準品)英文名稱: D-Alanine Methyl Ester Hydrochloride磷化熱休克蛋白27抗體包裝50mg
野馬追內(nèi)酯B(標準品)英文名稱: D-Alanine tert-Butyl Ester HydrochlorideHEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白7A蛋白抗體包裝1g
野馬追內(nèi)酯K英文名稱: D-Arginine人瘤病16型E7抗體包裝5g
野牡丹(標準品)英文名稱: ADMAHER2抗體包裝1g
野木瓜(標準品)英文名稱: N'-Nitro-D-arginine 人胎盤泌乳抗體包裝5g
野漆樹苷(標準品)英文名稱: D-Asparagine monohydrate熱休克蛋白27抗體包裝25g
葉黃; 二羥基-d-胡蘿卜(標準品)英文名稱: D-Aspartic acid 高遷移率族蛋白A1抗體包裝5g
葉(標準品)英文名稱: D-Aspartic acid 4-tert-butyl ester磷化HER2受體抗體包裝1g
葉下珠(標準品)英文名稱: D-Glutamic acid熱休克蛋白-20抗體包裝25g
夜香牛(標準品)英文名稱: Nα-Tosyl-L-lysine chloromethyl ketone HCl淀粉抗體包裝5g
一點紅(標準品)英文名稱: Glycyl-L-tyrosineA型流感病H1N1-M2蛋白抗體包裝100g
一葉秋堿 ,一葉萩堿(標準品)英文名稱: D-Leucine亨丁頓舞蹈癥相互作用蛋白12抗體包裝25g
一枝黃花(標準品)英文名稱: H-D-Lys-OH·HCl單純皰疹病1型DNA聚合催化亞單位抗體包裝5g
: HBUM171092資源名稱: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品硫脂抗體苦蒿;Blinin
秦氏蜜環(huán)菌Armillaria│qinii H.C. Wang & J. Zhao 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR硫氧還蛋白域包含蛋白6試劑盒可可堿;Theobromine
: Ye7231資源名稱: 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>97%,USP,BR硫氧還蛋白依賴性過氧化物還原,線粒體試劑盒咖啡乙酯;Ethyl caffeate
尿沉渣染色液(Sternheimer-Malbin法)白酒 乙酸乙酯、己酸乙酯 2-萘硫酚蘋果酸Elisa
土地桿 N-BOC-4-基脯氨酸Elisa
阿氏埃希氏 5-乙?;?2,3-二氫苯并[b]呋喃葡聚糖Elisa
溶血葡萄球 3-氯-5-氟苯甲葡萄糖-6-磷酸脫氫Elisa
解脂假絲酵母解脂變種 2-溴-6-甲酸葡萄糖6磷酸異構(gòu)Elisa
芽胞桿 5氯-2甲氧基苯酸葡萄糖合Elisa
季也蒙假絲酵母 2,3,5-三-O-芐基-β-L-阿拉伯呋喃糖葡萄糖激Elisa
嗜冷海桿狀 芴甲氧羰?;?6-氨基己酸肉桂酸-4-羥化Elisa
秦氏蜜環(huán) 2,6-二溴-4-(三氟甲氧基)苯三磷酸腺苷Elisa
水生黃桿 4-溴-2-鹽轉(zhuǎn)運三磷酸腺苷抗體Elisa
鴨疫里氏桿 4-(羥甲基)苯甲滲調(diào)蛋白Elisa
平臍蠕孢 2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟酸鹽水楊酸Elisa
大孢硬皮馬勃 2-乙基-4-甲基咪唑水楊酸甲酯Elisa
枯草芽孢桿 3-溴噻吩-2-甲絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移Elisa
塔賓曲霉 戴斯-馬丁試劑絲裂原激活的蛋白激;MAP激Elisa