詳細介紹
商品介紹:
微核分析/遺傳毒性分析熒光染料(DAPI)是一種藍色核酸染料,優(yōu)先染dsDNA,表現(xiàn)為可集中結合在DNA 雙鏈的AT 小溝,結合后的熒光會發(fā)生20 倍增強。同時,也可以結合RNA,與DNA 不同,一般認為DAPI 染料結合于RNA 的AU 區(qū)。DAPI/RNA 的復合體(500nm)有比染料與dsDNA 復合體(460nm)更長的熒光波長。DAPI 是一種常用的多色熒光技術中的核復染劑。他的藍色熒光可以與綠色、紅色、橙黃色探針形成鮮明對比。 根據(jù)操作說明使用,染料的背景可以很低,幾乎沒有細胞質(zhì)的背景標記。DAPI 可以用在多種實驗應用中,如細胞學標記、直接或間接地基于抗體的免疫熒光分析以及mRNA 表達的原味雜交或者與特定的細胞結構熒光試劑進行共染。DAPI 也可以用來分析多色流式細胞術中。 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:微核分析/遺傳毒性分析熒光染料
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:10mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
纖維蛋白原α(FGα)英文名稱:FGα ELISA Kit7號染色體開放閱讀框65抗體包裝0.5mg
纖維蛋白原(FG)英文名稱:FG ELISA Kit基轉(zhuǎn)移cyt-19抗體包裝1g
纖溶抑制因子(TAFI)英文名稱:TAFI ELISA Kit單核趨化蛋白4抗體包裝25g
纖溶原激活物抑制因子2(PAI2)英文名稱:PAI2 ELISA KitCD34抗體包裝5g
纖溶原激活物抑制因子1(PAI1)英文名稱:PAI1 ELISA Kit白共同抗原抗體包裝1g
夏科雷登氏結晶蛋白(CLC)英文名稱:CLC ELISA Kit磷化環(huán)磷腺苷反應元件調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝5g
細胞周期D3(CCND3)英文名稱:CCND3 ELISA Kit間隙連接蛋白37抗體包裝1g
細胞周期D2(CCND2)英文名稱:CCND2 ELISA Kit2型補體受體抗體包裝5g
細胞周期D1(CCND1)英文名稱:CCND1 ELISA Kit唾液轉(zhuǎn)移1/α-2,6唾液轉(zhuǎn)移抗體包裝1g
細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子3(SOCS3)英文名稱:SOCS3 ELISA Kit碳酐9抗體包裝5g
細胞外信號調(diào)節(jié)激2(ERK2)英文名稱:ERK2 ELISA Kit色P450 17抗體包裝100g
細胞外基質(zhì)磷糖蛋白(MEPE)英文名稱:MEPE ELISA Kit色P450 7A1抗體/膽固7a羥化包裝25g
細胞外基質(zhì)蛋白1(ECM1)英文名稱:ECM1 ELISA Kit膽固24羥化抗體包裝500g
P450家族成員7A1(CYP7A1)英文名稱:CYP7A1 ELISA Kit腫瘤新因子1抗體包裝5g
P450家族成員3A4(CYP3A4)英文名稱:CYP3A4 ELISA Kit膽固25α7羥化抗體包裝1g
球形節(jié)桿菌Arthrobacter│globiformis 質(zhì)量規(guī)格:含量> 99%組織蛋白去乙?;噭┖锌範钕偾虻鞍卓贵w
黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品組織蛋白S試劑盒乙型肝炎病核心抗體(HBcAb)國家參
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR組織蛋白L1試劑盒腸道病71型IgM抗體國家參考品
微核分析/遺傳毒性分析熒光染料朗比可假絲酵母 丁基基氯化銨同源盒蛋白HOXB13檢測試劑盒
四孢菇 1α-甲基雄烷-17β--3-酮/甲氫睪酮同源盒基因Six1檢測試劑盒
枯草芽孢桿 反式-3-己烯酸銅藍蛋白檢測試劑盒
梨黑星 3-丁炔-2-酮透明質(zhì)酸檢測試劑盒
新疆鹽地桿 1-BOC-2-甲透明質(zhì)酸合酶2檢測試劑盒
突孢毛殼 2-溴-6-氟甲苯透明質(zhì)酸結合蛋白檢測試劑盒
黑曲霉變種 3-亞甲基環(huán)丁透明質(zhì)酸酶檢測試劑盒
堿線屬 1-Boc-3-羥甲基氮雜環(huán)丁烷突狀表面特異性C型凝集素-間黏附分子3結合非整合素分子檢測試劑盒
赤霉 9-芴酮-1-羧酸褪黑硫酸鹽檢測試劑盒
無環(huán)田頭菇 硫異煙褪黑素檢測試劑盒
Candidatus Rhizobium 2-羥基喹啉-4-甲酸脫-γ-羧基凝血酶原檢測試劑盒
大腸埃希 庚酸烯酯脫嘌呤;脫嘧啶核酸內(nèi)切酶;氧化還原因子1檢測試劑盒
Ag-16(蘑菇) 2,2',5,5'-四氯二苯脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1檢測試劑盒
柿尾孢 葡乙脫氫表雄酮檢測試劑盒
地衣芽孢桿 3-氨基巴豆酸異酯脫氧胞苷激酶檢測試劑盒