產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Caspase-3活性測(cè)定試劑盒
英文名稱:Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
本試劑盒適用于測(cè)定哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞caspase-3活性。測(cè)定原理基于Caspase-3特異水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA),釋放硝基pNA。游離硝基pNA呈黃色在405nm具有大吸收峰,用普通可見光分光光度比色方法測(cè)定。根據(jù)pNA標(biāo)準(zhǔn)管吸光度OD值和標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算來自底物肽釋放的pNA濃度,得到Caspase-3水解活性。 Caspase-3是凋亡過程中主要的終末剪切酶,因而也是研究多的caspase,它激活pro-caspase-2,6,7,9等,特異水解多種凋亡關(guān)鍵蛋白如PARP,介導(dǎo)細(xì)胞核染色質(zhì)固縮、凋亡小體生成、核DNA斷裂。 運(yùn)輸及保存:試劑常溫運(yùn)輸。到達(dá)后按要求儲(chǔ)存,1年內(nèi)穩(wěn)定。 所需儀器:酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板;或可見光分光光度計(jì)配100μl容積的石英比色杯。 工作波長(zhǎng):大吸收波長(zhǎng)405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測(cè)定,但靈敏度略降。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
磺二嘧啶 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oseltamivir phosphate 凝集蛋白家族11抗體包裝1g
磺二氧基嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oseltamivir phosphate 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝5g
磺惡唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dibucaine HCl20號(hào)染色體開放閱讀框96抗體包裝25g
磺基嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Donepezil 3號(hào)染色體開放閱讀框26抗體包裝5g
磺氧噠(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doripenem 粘附分子2抗體包裝25g
磺間二氧嘧啶鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doripenem 耳聾-狀腺腫綜合征相關(guān)COBL蛋白抗體包裝5g
磺間氧嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doxapram Hydrochloride20號(hào)染色體開放閱讀框195抗體包裝1g
磺脒(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doxapram Hydrochloride7號(hào)染色體開放閱讀框62抗體包裝1g
磺嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doxylamine succinate9號(hào)染色體開放閱讀框174抗體包裝1g
磺嘧啶鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doxylamine succinate6號(hào)染色體開放閱讀框64抗體包裝25g
磺嘧啶銀(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Drospirenone免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體包裝5g
磺噻唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Drospirenone透明質(zhì)介導(dǎo)游走受體抗體包裝1g
磺異噁唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethiny Estradiol周期樣Y1抗體包裝5g
磺芐西林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethiny Estradiol周期J抗體包裝100ml
磺草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethionamide周期L抗體包裝25g
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR心肌肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒吳茱萸內(nèi)酯;Evodine
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BP協(xié)同激分子受體試劑盒五味子;Schisandrin C
鏈狀假絲酵母Candida│catenulata 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品小而密低密度脂蛋白試劑盒五味子乙;schisandrol B
Caspase-3活性測(cè)定試劑盒虎皮粘蓋牛肝 2-氨基-3-甲基-5-氯吡啶產(chǎn)幽門螺桿抗體IGGElisa
枯草芽孢桿 乙酰酮化鈰(III) 水合物二酰Elisa
松針散斑殼 醋酸氯己定琥珀酰Elisa
枯草芽孢桿 4-氟-2-(三氟甲基)溴芐傷寒IgM抗體Elisa
大腸埃希氏 異丁酸香蘭酯跨膜蛋白97Elisa
嚙蝕艾肯氏 5-溴-2-間二甲苯絲酸酮酸氨基轉(zhuǎn)移Elisa
星孢鏈霉 2,5-二氯肉桂酸胖Elisa
大腸埃希氏桿 4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯;4-甲基-5-乙氧羰基噻唑脂肪因子Elisa
凝結(jié)芽孢桿 D-焦谷氨酸叔丁酯1,3-Elisa
蘇云金芽孢桿 1-Boc-2-羥甲基哌1,2-Elisa
枯草芽孢桿 5-氯苯并噻吩核糖核酸LElisa
產(chǎn)氨棒桿 1-溴-4-異丁基苯甲血清白蛋白結(jié)合物Elisa
釀酒酵母 3-苯甲酰酸內(nèi)皮受體AElisa
紅球 D-葡糖酸-gamma-內(nèi)酯酮內(nèi)皮受體BElisa
挪威假絲酵母 4-異基芐氯Tafazzin蛋白Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)