商品介紹:
本試劑盒適用于測定哺乳動物組織、細胞caspase-1活性。測定原理基于Caspase-1特異水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA(Ac-YVAD-pNA),釋放出游離的硝基pNA,后者呈黃色在405nm具有大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應(yīng)于Caspase-1的水解活性。 細胞凋亡屬于程序化細胞死亡,可見于各種器官和細胞,在正常發(fā)育、生理、病理過程中對細胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個成員。其中Caspase-1是可剪切IL-1b和IL-18前體產(chǎn)生活性細胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產(chǎn)生20kD和10kD片斷,這兩個片斷可以形成異源二聚體,并進一步形成四聚體。此四聚體具有蛋白酶活性。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調(diào)節(jié)細胞凋亡,并通過對細胞因子前體的剪切來調(diào)控相關(guān)細胞因子介導的免疫炎性反應(yīng)。 運輸及保存:試劑常溫運輸。到達后按要求儲存,1年內(nèi)穩(wěn)定。 所需儀器:酶標儀與96孔酶標板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。 工作波長:大吸收波長405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測定,但靈敏度略降。 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Caspase-1活性測定試劑盒
英文名稱:Caspase 1 Activity colorimetric assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
蝶呤(標準品)英文名稱: Fluoxetine Hydrochloride8號染色體開放閱讀框4抗體包裝100g
蝶呤二鈉鹽 (標準品)英文名稱: Fluvoxamine maleateCD73抗體包裝25g
磺丁脲(標準品)英文名稱: Fluvoxamine maleate軸突相關(guān)粘附分子抗體包裝500g
咪唑英文名稱: Formestane6型膠原蛋白α5抗體包裝1g
咪唑(標準品)英文名稱: Formestane神經(jīng)粘附分子CALL抗體包裝5g
芬那(標準品)英文名稱: Fosinopril sodium中性粒殺菌蛋白BP30抗體包裝100ml
砜霉(標準品)英文名稱: Furosemide21號染色體開放閱讀框56抗體包裝500ml
鈷(標準品)英文名稱: FurosemideT淋巴CD1抗體包裝50ml
磺地平(標準品)英文名稱: Gemfibrozil角蛋白5抗體包裝100g
磺倍他司?。藴势罚┯⑽拿Q: Gemfibrozil補體C9a抗體包裝25g
磺達沙星(標準品)英文名稱: Gliclazide20號染色體開放閱讀框141抗體包裝1g
磺多拉司瓊(標準品)英文名稱: Gliclazide20號染色體開放閱讀框160抗體包裝5g
磺多沙唑(標準品)英文名稱: Glyburide/Gliebenclamide親環(huán)蛋白(親環(huán))40抗體包裝100g
磺酚妥拉明(標準品)英文名稱: Glyburide/GliebenclamideT調(diào)控相關(guān)蛋白抗體包裝25g
磺吉米沙星(標準品)英文名稱: Glimepiride突觸后蛋白CRIPT抗體包裝5g
白靈側(cè)耳(白靈菇)Pleurotus│nebrodensis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品相撲結(jié)合UBC9試劑盒無檸檬;Citric acid
季也蒙畢赤酵母Pichia│guilliermondii 質(zhì)量規(guī)格:干品純度≥90.0%,干品含量≥85.0%,USP34腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)運蛋白試劑盒文多靈;Vindoline
pTargetFpTargetF 質(zhì)量規(guī)格:含量測定腺苷脫試劑盒五味子;Schisandrin
Caspase-1活性測定試劑盒北方蜜環(huán) 美拉諾坦半胱氨酸蛋白9Elisa
釀酒酵母 17-AAG載脂蛋白E2Elisa
鏈霉 3-氯-4-氟苯甲糖類抗原Elisa
白地霉 Bovine adrenal medulla dodecapeptide血小板衍生生長因子AAElisa
天藍褐鏈霉 4-氟-3-硝基氯芐真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1Elisa
釀酒酵母 2-甲氧基-3-連接橋粒斑珠蛋白Elisa
大腸埃希 Regorafenib (BAY 73-4506)抗鏈球溶血0Elisa
膠孢 [Arg8]-Vasotocin acetate saltF肌動蛋白Elisa
pET-23a NVP-AUY922Talin-1Elisa
馬賽 2-甲氧基-3-硝基吡啶δ-維生EElisa
堅強芽孢桿 雙(2-甲氧乙基)氨基三氟化硫(BAST)γ-維生EElisa
擬雷氏日歸殼 1H-1,2,3-三氮唑-4-鹽酸鹽α-維生EElisa
陰溝腸桿 3,5-二氯-2-硝苯β-胡蘿卜Elisa
腸膜明串珠 -氟-4-甲基-5-硝苯黃體生成釋放Elisa
圓弧青霉 2-氯-3-氟-4-羥基吡啶溶體相關(guān)膜蛋白2抗體Elisa