使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。，酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。   24μg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
 12μg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
 6μg/ml     3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
 3μg/ml     2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
 1.5μg/ml   1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多，更加方便我們的科研學者進行科學實驗，是科研實驗的好伙伴。

實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備；
2. 加樣（標準品及樣本）100µL，37°C孵育1小時；
3. 吸棄，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時；
4. 洗板3次；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。

樣本實驗前準備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
（5）培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
注意事項：
1.加樣：
①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件；
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水??；
3.洗板：
①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次，或適當增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結(jié)果，酶標儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下，需先預熱15-30 min再進行測試。

293KB人胚腎細胞(小鼠MHCⅠ分子Kb基因修飾細胞）1ml/T75

BC-009人癌細胞1ml/T75

BC-019人癌細胞1ml/T75

BC-020人癌細胞1ml/T75

BC-021人癌細胞1ml/T75

BC-022人癌細胞1ml/T75

BT-20人癌細胞1ml/T75

HCC1937人癌細胞1ml/T75

MDA-MB-231人癌細胞1ml/T75

MCF 7B人癌細胞1ml/T75

MDA-MB-157人癌細胞1ml/T75

MDA-MB-415人癌細胞1ml/T75

MDA-MB-468人癌細胞1ml/T75

MDA-MB-468-06人癌細胞1ml/T75

FoxO1叉頭框蛋白01ELISA Kitlarge S protein  人乙肝病毒pre S1/S2蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlCDK5  周期素依賴性激酶5抗體 規(guī)格: 0.1ml

MLK2/MAP3K10  絲裂原活化蛋白激酶3K10抗體 規(guī)格: 0.2mlNucleolin/C23  核仁蛋白C23抗體 規(guī)格: 0.2ml

AMBRA1  自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體 規(guī)格: 0.2mlAPS  APS抗體 規(guī)格: 0.1ml

GRP  促胃泌素釋放肽抗體 規(guī)格: 0.2mlAPH1a  早老素γ分泌酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

IQCG  IQCG蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSOSSC/C9orf80  單鏈DNA結(jié)合蛋白相互作用蛋白1 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PRKCA(Ser657+Tyr658)  磷酸化蛋白激酶C抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-PAK4(Ser99)  磷酸化p21激活激酶4抗體 規(guī)格: 0.1ml

PDZD7  PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK7蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlCIDE A  DNA斷裂因子相似蛋白A抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PTK2(Tyr576+Tyr577)  磷酸化粘著斑激酶抗體 規(guī)格: 0.1mlGlycerol kinase  甘油激酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

ATG1/ULK1  自噬相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlPRR11  富含脯氨酸蛋白11抗體 規(guī)格: 0.2ml

TSHR  促甲狀素受體抗體 規(guī)格: 0.1mlMAGEA10  黑色素瘤相關(guān)抗原10抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-dog IgG/Cy5  Cy5標記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1mlNSMase2  中性鞘磷脂2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Calponin 1/COLP  鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.1mlMEI-1  減數(shù)分裂缺陷蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

C16orf7/ATP-BL   16號染色體開放閱讀框7抗體 規(guī)格: 0.2ml

Shrimp tropomyosin  南美白對蝦過敏原蛋白（蝦原肌球蛋白）抗體 規(guī)格: 0.1ml