商品介紹:
線粒體提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。 操作步驟: 1. 樣本處理: a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨組織20次; b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿:消化細(xì)胞,PBS洗滌,800g離心5~10 min收集細(xì)胞,計(jì)數(shù)。每次提取需要5×107個(gè)細(xì)胞,加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨30~40次。 2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管,4℃,1000g 離心5 min。 3. 取上清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,4℃,1000g再次離心5 min。 4. 取上清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分,可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管,線粒體沉淀在管底。 5. 往線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀,4℃,1000 g 離心5 min。 6. 取上清,轉(zhuǎn)移至新的離心管中,4℃, 12,000 g 離心10 min。棄上清,高純度的線粒體沉淀在管底。 7. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀,立即使用或-70℃保存。 儲(chǔ)存條件:-20℃ |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
線粒體提取試劑盒 |
| 50T|100T | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
B-細(xì)胞κ-輕肽基因增強(qiáng)子抑制因子激β(IκBKβ)英文名稱:IκBKβ ELISA Kit胃癌多藥耐藥相關(guān)蛋白包裝5g
B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC1)英文名稱:BLC1 ELISA Kit酪蛋白激casein kinase Iα抗體包裝1g
B-淋巴細(xì)胞激活抗原B7-2(LAB7-2)英文名稱:LAB7-2 ELISA Kit磷化酪蛋白激casein kinase Iα抗體包裝1g
BMP結(jié)合內(nèi)皮調(diào)節(jié)因子(BMPER)英文名稱:BMPER ELISA Kit磷化酪蛋白激casein kinase Iα抗體包裝5g
BH3相互作用域死亡激動(dòng)劑(Bid)英文名稱:Bid ELISA Kit肌動(dòng)蛋白調(diào)節(jié)蛋白CAPG抗體包裝5MG
Bcl2相關(guān)髓細(xì)胞白血病序列1(MCL1)英文名稱:MCL1 ELISA KitⅠ型膠原/1型膠原a1抗體包裝100mg
Bcl2關(guān)聯(lián)X蛋白(Bax)英文名稱:Bax ELISA KitⅢ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白抗體包裝25mg
A類清道夫受體3(SCARA3)英文名稱:SCARA3 ELISA KitCD96抗體包裝1g
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G2(ABCG2)英文名稱:ABCG2 ELISA Kit貓眼綜合征染色體候選基因2抗體包裝25g
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白C6(ABCC6)英文名稱:ABCC6 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框146抗體包裝5g
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ABCA1)英文名稱:ABCA1 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框150抗體包裝100g
Apelin13蛋白(AP13)英文名稱:AP13 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框156抗體包裝25g
Apelin12蛋白(AP12)英文名稱:AP12 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框159抗體包裝5g
Apelin蛋白(APLN)英文名稱:APLN ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框162抗體包裝5mg
AMPA離子能谷受體4(GRIA4)英文名稱:GRIA4 ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框163抗體包裝1g
解脂耶羅威亞酵母Yarrowia│lipolytica 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 乙酰酯試劑盒洋川芎內(nèi)酯I;Senkyunolide
刺黑烏霉菌Memnoniella│echinata 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品乙酰受體抗體試劑盒洋川芎內(nèi)酯H;Senkyunolide
秦氏蜜環(huán)菌Armillaria│qinii H.C. Wang & J. Zhao 質(zhì)量規(guī)格:含量960~1030µg/mg,USP30乙酰試劑盒洋川芎內(nèi)酯A;Senkyunolide
線粒體提取試劑盒沙門氏馬凝集試驗(yàn)抗原 5-氨基-3-甲基-1-苯基吡唑卵清蛋白Elisa
枯草芽孢桿 2-溴-3-甲氧基苯高遷移率族蛋白B1-IgG抗體Elisa
蘇云金芽孢桿庫(kù)爾斯塔克亞種 3-氯, 98+%高遷移率族蛋白B1-IgM抗體Elisa
產(chǎn)酸克雷伯氏 1-環(huán)基-6,7-二氟-1,4-二氫-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸高遷移率族蛋白B1-IgA抗體Elisa
果生鏈核盤 (2R,3S)-(-)-N-叔丁氧羰基-6-氧代-2,3-二苯基嗎啉抗卵巢抗體Elisa
香栓 2-辛基-2H-苯并三唑抗心磷脂抗體Elisa
栗疫 2-溴咪唑并[1,2-a]吡啶肝結(jié)合Elisa
鴨疫里氏桿 Boc-DL-色白介1受體Elisa
空泡單胞 5-乙?;?2(1H)-吡啶酮氨基?;?Elisa
糞生黑蛋巢 4-乙氧基鹽酸鹽死骨片1Elisa
普利茅斯沙雷氏 2,3-二氟-4-基苯CD90分子Elisa
孟氏假單胞 4-磺酰杯[4]芳烴水合物胰蛋白Elisa
畢赤酵母 5-溴-2-氟苯酸JAGGED1蛋白Elisa
漢遜德巴利酵母 N-[(1R)-2-[3-(氨基磺酰基)-4-甲氧基]-1-甲基乙基]乙酰1Elisa
香矛假單胞 1-吡唑甲蛋白C抑制物Elisa