以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Acumapimod(BCT197)是p38MAP激酶抑制劑,對(duì)p38α的IC50值小于1μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):836683-15-9 純度:99.14% 分子量:385.42 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
枯草芽孢桿菌1號(hào)染色體開放閱讀框192抗體Human PEX2(Peroxisomal Biogenesis Factor 2) ELISA Kit人食欲/阿立新B(OX-B)免疫試劑盒
凍干補(bǔ)體1號(hào)染色體開放閱讀框194抗體Human PDE4D(Phosphodiesterase 4D, cAMP Specific) ELISA Kit人生長(zhǎng)抑(SS)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌1號(hào)染色體開放閱讀框198抗體Human PDIA2(Protein Disulfide Isomerase A2) ELISA Kit人生長(zhǎng)激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)免疫試劑盒
Paenibacillus1號(hào)染色體開放閱讀框21抗體Human PDIA3(Protein Disulfide Isomerase A3) ELISA Kit人生長(zhǎng)激釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒
大腸埃希菌1號(hào)染色體開放閱讀框216抗體Human PCDHβ16(Protocadherin Beta 16) ELISA Kit人生長(zhǎng)激結(jié)合蛋白(P)免疫試劑盒
大腸埃希菌1號(hào)染色體開放閱讀框43抗體Human PCDHγA2(Protocadherin Gamma A2) ELISA Kit人生長(zhǎng)激(GH)免疫試劑盒
大腸埃希菌1號(hào)染色體開放閱讀框50抗體Human PDIA5(Protein Disulfide Isomerase A5) ELISA Kit人生長(zhǎng)分化因子-9(GDF-9)免疫試劑盒
黃硬皮馬勃1號(hào)染色體開放閱讀框49抗體Human PCI(Protein C Inhibitor) ELISA Kit人生長(zhǎng)分化因子3(GDF3/UNQ222/PRO248)免疫試劑盒
柱孢綠僵菌1號(hào)染色體開放閱讀框53抗體Human PCIII(Procollagen III) ELISA Kit人生長(zhǎng)分化因子2(GDF2)免疫試劑盒
美麗胡枝子根瘤菌1號(hào)染色體開放閱讀框54抗體Human PDK4(Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 4) ELISA Kit人生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)免疫試劑盒
棉阿舒囊霉1號(hào)染色體開放閱讀框55抗體Human PDI(Protein Disulfide Isomerase) ELISA Kit人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)免疫試劑盒
綠色木霉1號(hào)染色體開放閱讀框56抗體Human PDIA6(Protein Disulfide Isomerase A6) ELISA Kit人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)免疫試劑盒
大腸埃希菌1號(hào)染色體開放閱讀框65抗體Human PCNA(ProlifeRating Cell Nuclear Antigen) ELISA Kit人腎損傷分子1(Kim-1)免疫試劑盒
釀酒酵母1號(hào)染色體開放閱讀框64抗體Human ON(Osteonectin) ELISA Kit人腎前體免疫試劑盒
弓形蟲(GTS-2株)1號(hào)染色體開放閱讀框69抗體Human OTR(Oxytocin Receptor) ELISA Kit人腎(Renin)免疫試劑盒
灰樹花-41號(hào)染色體開放閱讀框77抗體Human NRG-2(Neuregulin 2) ELISA Kit人腎上腺髓質(zhì)前體(Pro-ADM)免疫試劑盒
曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BCCD209分子試劑盒γ-倒捻子
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BCCD19分子試劑盒扁豆堿
: NRRLB-24209=JCM12669=DSM44594資源名稱: Amycolatopsisdecaplanina 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRCD15分子試劑盒冬凌草乙
p38MAP激酶抑制劑(Acumapimod)神經(jīng)叢蛋白B3抗體包裝100g
PHD指蛋白21A抗體包裝25g
富含脯蛋白11抗體包裝5g
三磷腺苷受體受體P2X3抗體包裝100g
相關(guān)血漿蛋白A抗體包裝25g
棕櫚酰蛋白硫酯1抗體包裝25g
磷化絲/蘇/酪抗體包裝5g
核仁同源蛋白17抗體包裝1g
p53激活蛋白2抗體包裝5g
蛋白調(diào)解因子10抗體包裝1g
環(huán)指蛋白3抗體包裝100g
脫氫激亞型2抗體包裝25g
Rho相關(guān)結(jié)構(gòu)域BTB蛋白質(zhì)1抗體包裝5g
豬瘟病抗體包裝1g
腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體包裝5g