以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Salmeterol xinafoate是長(zhǎng)效β2能受體(β2AR)激動(dòng)劑,對(duì)WT β2AR的Ki值為1.5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):94749-08-3 別名:GR 33343X xinafoate 純度:97.66% 分子量:603.75 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
2-氧吡格雷鹽鹽(非對(duì)映異構(gòu)體混合物)英文名稱: Isoviolanthrone膜鈣ATP1抗體包裝500ml
2-乙酰基-2-脫氧-D-半乳糖英文名稱: 2-Methylcyclopenta[l]phenanthrene膜鈣ATP4抗體包裝500mg
2-異基-6-基酚(泊酚雜質(zhì)O)英文名稱: Naphtho[2,3-a]pyrene膜鈣ATP4B抗體包裝1mg
21(R)-羥基孟魯司特英文名稱: 2-Chlorophenothiazine膜鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP抗體包裝10g
21(S)-羥基孟魯司特英文名稱: 2-Chloro-4,6-diphenyl-1,3,5-triazine溶質(zhì)載體蛋白家族21成員2抗體包裝100mg
24,32-雙-O-(tert-butyldimeth...英文名稱: Indanthrone脈周蛋白1抗體(胃癌抗原蛋白Ga50)包裝500mg
25-O-去乙?;2纪∮⑽拿Q: Julolidine端粒抑制因子PinX-1抗體包裝1g
25-羥基孟魯司特英文名稱: 9-Julolidinecarboxaldehyde泌乳受體抗體包裝25g
25-去乙?;娡∮⑽拿Q: 9,10-Phenanthrenequinone多囊腎蛋白1樣3抗體包裝5g
25-脫乙?;F接⑽拿Q: Phenanthridine磷肌相互作用蛋白抗體包裝100g
3''-羥基辛伐他汀鈉鹽英文名稱: 2,2'-Bi-4-lepidine嘌呤核苷磷化抗體包裝25g
3'-Epi 吉西他濱英文名稱: 2,2'-Bipyrimidyl磷化蛋白激C/p-PKC ε抗體包裝1g
3'-對(duì)羥基紫杉英文名稱: 2,2'-Bicinchoninic Acid膜調(diào)控蛋白Paralemmin 1抗體包裝5g
3'-羥基華法林英文名稱: 1,2-Dimethyl-3-propylimidazolium Iodide脯羥化2抗體包裝25g
3'-羥基辛伐他汀英文名稱: Ethyltripropylammonium Iodide鞘脂激活蛋白原抗體包裝5g
布勒酵母Bullera│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,二氫嘧啶脫氫(DPD)抑制劑鉤端螺旋體IgG試劑盒甜蜜;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
耶羅威亞解脂酵母Yarrowia│lipolytica 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品弓蛔蟲試劑盒β-胡蘿卜;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
鏈格孢Alternaria│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品庚型肝炎病抗體試劑盒維生B5(泛鈣B5);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品
β2AR激動(dòng)劑(Salmeterol xinafoate)棕櫚酯Human
棕櫚異酯Human, Mouse, Rat
(-)-3-萜Human
(-)-薄荷Human, Mouse
(-)-紫蘇Human
(+)-α-[1-(二)乙]Human
(+)-薄荷Human
(+)-小茴香Human, Mouse
(+)-紫蘇Human