商品介紹:
用途: 利用根據(jù)線蟲在固定時體內(nèi)各器官的氫離子濃度和生理狀態(tài)不同,可區(qū)分線蟲和植物組織,游離的線蟲經(jīng)過染色后內(nèi)部器官染成不同顏色,便于觀察識別,主要用于觀察游離線蟲的染色 注意事項(xiàng): 主要由次甲藍(lán)、乙醇、蒸餾水等組成 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
裂褶菌AP-1μ2抗體Human LRRC8C ELISA Kit小鼠胰島樣生長因子1受體(IGF-1R)免疫試劑盒
柱形孢鏈霉菌肥大膜抑制性受體Allergin1抗體Human LRRC52 ELISA Kit小鼠胰島樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒
傳染性支氣管炎病腦鈉通道蛋白1抗體Human LSAMP ELISA Kit小鼠胰島受體β(ISR-β)免疫試劑盒
土庫曼野野村氏菌肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合亞單位B1抗體Human LRWD1(Leucine-rich repeat and WD repeat-containing protein 1) ELISA Kit小鼠胰島降解(IDE)免疫試劑盒
黑木耳三磷腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體Human LSG1 ELISA Kit小鼠胰島(INS)免疫試劑盒
黃桿菌甲胎蛋白抗體Human LSM1 ELISA Kit小鼠原激活肽(TAP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體Human LRRC29 ELISA Kit小鼠-1(trypsin-1)免疫試劑盒
檸檬形克勒克酵母ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體Human LRRC41 ELISA Kit小鼠(trypsin)免疫試劑盒
球孢白僵菌肌動蛋白結(jié)合蛋白LIM蛋白3抗體Human LRRC47 ELISA Kit小鼠胰α淀粉(AMY2A)免疫試劑盒
Rhizobium alkalisoli性鈣調(diào)蛋白3抗體Human LRRC47 ELISA Kit小鼠一氧化碳血紅蛋白(HbCO)免疫試劑盒
產(chǎn)腸大腸埃希氏菌磷化CD156b抗體Human LRRC4C ELISA Kit小鼠一氧化氮合成(NOS)免疫試劑盒
產(chǎn)朊假絲酵母乙脫氫5抗體Human LSG1 ELISA Kit小鼠一氧化氮(NO)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌乙脫氫6抗體Human LRRC52 ELISA Kit小鼠葉(FA)免疫試劑盒
假單胞菌溶血磷脂?;D(zhuǎn)移5抗體Human LRRC18 ELISA Kit小鼠氧化型(GSSG)免疫試劑盒
粉狀畢赤酵母遺傳性失明相關(guān)蛋白AIPL1抗體Human LRCH3 ELISA Kit小鼠氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)免疫試劑盒
灰樹花G25免疫調(diào)節(jié)蛋白AIRE抗體Human LRRC20 ELISA Kit小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)免疫試劑盒
檸檬球菌Citricoccus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC胞外超氧化物歧化試劑盒3-乙南美楝屬二酯
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR胞漿型磷脂A2-α試劑盒乙酰基二氫美味草A
傘枝犁頭霉Absidia│corymbifera 質(zhì)量規(guī)格:BR包蟲抗體IgG 羽扇烯
線蟲活體染色液(多色藍(lán)法)植物乳桿 2-羥基-6-白介28AElisa
光孢黃叢枝珊瑚 2,4,5-三溴甲苯巨噬炎性蛋白1γElisa
蘋果鏈格孢 酸抗甲狀腺過氧化物抗體Elisa
Pseudomonas coleopterorum 2,5-二甲氧基芐N-甲基-D-天冬氨酸受體Elisa
蘇云金芽胞桿印第安那亞種 2-基-5-氟吡啶跨膜蛋白119Elisa
中國臺灣根霉 對乙DNA去甲基化轉(zhuǎn)移Elisa
葡萄座腔 3--2-酚β葡萄糖酸苷Elisa
干草鞘氨單胞 4-硝基愈創(chuàng)木酚組蛋白去甲基化轉(zhuǎn)移Elisa
Marinobacter excellens 丁酰乙酸乙酯過氧化物體增殖物激活受體δ Elisa
陰溝腸桿溶解亞種 3-氨基-2,2-二甲基酰Krueppel樣因子6Elisa
淡紫擬青霉 2'-乙基-6'-甲基-2-乙酰苯胰島受體βElisa
葉片微桿 6-氟靛紅CD86分子Elisa
黑靈芝 2,3,4,6-四-O-基硅基-D-葡萄糖酸內(nèi)酯成纖維生長因子7Elisa
釀酒酵母 四化五烯ApelinElisa
穿孔艾美耳球蟲 聚六胍鹽酸鹽蛋白激B2Elisa