以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
商品介紹:
細胞凋亡是細胞的基本特征之一,在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一種分子量為35.8 KD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)高親和力特異結(jié)合。FITC-Annexin V 結(jié)合到凋亡細胞后,在藍色光的激發(fā)下,發(fā)出綠色熒光,區(qū)分出凋亡細胞與正常細胞。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)是一種核酸染料,它不能穿透完整細胞膜,但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透,并使細胞核紅染。將FITC-Annexin V 與PI 匹配使用,可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞區(qū)分開來。 儲存條件:2~8℃,有效期一年 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
2,3-二磷甘油(2,3-BPG)英文名稱:2,3-BPG ELISA Kit1號染色體開放閱讀框84抗體包裝1g
1號染色體開放閱讀框85(C1orf85)英文名稱:C1orf85 ELISA KitE3泛蛋白連接CHIP蛋白抗體包裝5g
17-羥孕(17-OHP)英文名稱:17-OHP ELISA Kit肉堿O-乙?;D(zhuǎn)移包裝100g
17-β-羥基類固脫氫10(HSD17β10)英文名稱:HSD17β10 ELISA Kit5號染色體開放閱讀框45抗體包裝25g
155kDa核孔蛋白(NUP155)英文名稱:NUP155 ELISA Kit5號染色體開放閱讀框48抗體包裝500g
12-羥基二十烷四烯(12-HETE)英文名稱:12-HETE ELISA Kit6號染色體開放閱讀框136抗體包裝1g
10kDa熱休克蛋白1(HSP10)英文名稱:HSP10 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框138抗體包裝25g
10kDa干擾γ誘導蛋白(IP10)英文名稱:IP10 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框145抗體包裝5g
107kDa肌多聚磷-4-磷Ⅰ型(INPP4A)英文名稱:INPP4A ELISA KitCD39抗體包裝100ml
1,25-二羥基維生D3(DHVD3)英文名稱:DHVD3 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框106抗體包裝500ml
2-氧基雌二英文名稱: Acarbose 6號染色體開放閱讀框115抗體包裝100ml
2-巰基乙烷磺鈉(美司那)英文名稱: Acarbose 6號染色體開放閱讀框123抗體包裝500ml
5-氮胞苷/阿扎胞苷/5-氮雜胞嘧啶核苷英文名稱: Acyclovir6號染色體開放閱讀框129抗體包裝1g
6-硫鳥嘌呤英文名稱: Acyclovir6號染色體開放閱讀框129抗體包裝5g
Alectinib;CH5424802英文名稱: Adenosine6號染色體開放閱讀框132抗體包裝25g
致病性大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品胰高血糖樣肽2受體試劑盒異麥角甾苷;Isoacteoside
蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereu 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR胰高血糖樣肽2試劑盒鳶尾黃;Tectorigenin
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品胰高血糖樣肽1受體試劑盒蕓香柚皮苷;Narirutin
ANNEXIN V- FITC/PI凋亡檢測試劑盒凍干補體 R-2,6-二氨基-4,5,6,7-四氫苯并噻唑神經(jīng)顆粒Elisa
美澳型核果褐腐病 環(huán)十五內(nèi)酯傳染性胸膜肺炎Elisa
Paenibacillus 4-乙炔基可替寧Elisa
大腸埃希 1,4,7-基二乙烯三激肽釋放原Elisa
大腸埃希 銨二(氧酸根)羰基鈦酸(IV)水合物, Puratronic硫代酸反應(yīng)物Elisa
大腸埃希 溴化鋇, 無水堿性磷酸Elisa
黃硬皮馬勃 5-氨基-吡唑-3-甲酸乙酯蔗糖異麥芽糖Elisa
柱孢綠僵 3-(2,5-二甲氧基苯基)酸蔗糖異麥芽糖Elisa
美麗胡枝子根瘤 3-氨基-4-三氟甲苯白介39Elisa
棉阿舒囊霉 4-氯-3-甲?;筋w粒AElisa
綠色木霉 5-基-1H--2-羧酸乙酯穿孔;成孔蛋白Elisa
大腸埃希 5-乙氧基殼三糖Elisa
釀酒酵母 尿刊酸登革熱病Elisa
弓形蟲(GTS-2株) 4-溴-1,1,2-三氟-1-乙型肝炎病Elisa
灰樹花-4 MDA 19絲氨酸蛋白抑制劑B1Elisa