以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Lorcaserin(APD356)是人5-HT2C受體的*激動劑,Ki為15nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:616202-92-7 別名:APD-356 分子式:C??H??ClN 分子量:195.69 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
棲藻海桿狀菌心肌肌球蛋白重鏈抗體Human SGLT3/SLC5A4 ELISA Kit大鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒
芥黃蜜環(huán)菌HECT E3泛鏈接抗體Human SFXN1 ELISA Kit大鼠3氧代5α類固4脫氫2(SRD5A2)免疫試劑盒
多主葡萄殼菌組蛋白去乙酰化11抗體Human SFT2D3 ELISA Kit大鼠3-硝基酪(3-NT)免疫試劑盒
根瘤菌磷化荷爾蒙敏感脂肪抗體Human SFXN2 ELISA Kit大鼠3-羥基-3-甲基戊二酰合(HMGCS)免疫試劑盒
松生擬層孔菌HHO1蛋白抗體Human SH3BP5 ELISA Kit大鼠3-O-甲基多巴(3-OMD)免疫試劑盒
Stenotrophomonas rhizophila磷化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體Human SH3BP4 ELISA Kit大鼠Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)免疫試劑盒
玫瑰考克氏菌磷化荷爾蒙敏感脂肪抗體Human SH2B1 ELISA Kit大鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒
菜豆根瘤菌磷化組蛋白H1.4抗體Human SH3D19 ELISA Kit大鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒
巨孢鏈霉菌羥酰谷胱甘肽水解蛋白抗體Human SH2D2A ELISA Kit大鼠26S蛋白體(26S PSM)免疫試劑盒
短柄帚霉磷化組蛋白去乙酰化5抗體Human SH2D1A ELISA Kit大鼠25羥基維生D3(25 HVD3)免疫試劑盒
玉米大斑病菌人巨病抗體Human SH2D1B ELISA Kit大鼠20S蛋白體(20SP)免疫試劑盒
糞腸球菌磷化組蛋白去乙酰化4/5/7抗體Human SH2D3A ELISA Kit大鼠2,3-二磷甘油(2,3-DPG)免疫試劑盒
屎腸球菌磷化HER2受體抗體Human SH2D3C ELISA Kit大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)免疫試劑盒
檸條根瘤菌磷化荷爾蒙敏感脂肪抗體Human SFRS8 ELISA Kit大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)免疫試劑盒
畢赤酵母肝癌上調(diào)蛋白抗體Human SGLT3/SLC5A4 ELISA Kit大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CTX-Ⅰ)免疫試劑盒
EscherichiaHRAS樣抑制因子3抗體Human SFRS9 ELISA Kit大鼠Ⅰ型前膠原(PCⅠ)免疫試劑盒
淡紫擬青霉Paecilomyce│lilacinus 質(zhì)量規(guī)格:0.105mg/ml三葉豆紫檀苷
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:0.100mg/ml乙酰紫堇靈
銅綠假單胞菌Pseudomonas│aeruginosa 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品異槲皮苷
5-HT2C受體激動劑(Lorcaserin)Aurora B 有絲分裂激B抗體二十六烷 ≥99.5% (GC)
Aurora C 有絲分裂激B抗體七氟丁 離子色譜級
Aurora A/B/C 有絲分裂激A/B/C抗體DL-高半胱氨 95%
B7-H1/CD274 程序性死亡配體1抗體5-羥糠 >99%
B7-DC/CD273 程序性死亡配體2抗體1,2-十六烷二 95%
ICOS-L/B7-H2/CD275 誘導(dǎo)協(xié)同激分子配體CD275抗體正庚烷 Standard for GC,>99.5%(GC)
B7H4 B7-H4抗體8-羥喹啉-5-磺 水合物 98%
BACE/ASP2 β分泌抗體二十一烷 ≥99.5% (GC)