商品介紹:
本Hoechst 33258染色液可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色,也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。 CAS號(hào):23491-45-4 分子式:C25H24N6O·3HCl 分子量:533.88 儲(chǔ)存條件:-20℃避光,有效期一年 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Hoechst 33258 染色液(即用型)
英文名稱:Hoechst 33258 Stain solution(ready-to-use)
產(chǎn)品規(guī)格:10ml|50mL
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
埃博霉B;帕土匹龍英文名稱: Amikacin Sulfate CERD4蛋白抗體包裝250mg
埃博霉C英文名稱: Amikacin Sulfate CES1P1蛋白抗體包裝5MG
埃博霉D英文名稱: Amphotericin B羧酯2抗體包裝1g
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艾力替尼磺鹽(AST1306)英文名稱: Angiotensin Acetate羧酯4A抗體包裝25g
磷?。ㄈ┯⑽拿Q: Anastrozole羧酯6抗體包裝100g
魯米特英文名稱: AnastrozoleCezanne蛋白抗體包裝25g
奧拉帕尼英文名稱: Apramycin sulfate內(nèi)臟移位線管蛋白CFC1蛋白抗體包裝5g
奧沙利鉑英文名稱: Apramycin sulfate補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白2抗體包裝10ml
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蓓薩羅丁;貝沙羅汀英文名稱: ArgatrobanCpG結(jié)合蛋白抗體包裝1g
丁氮芥英文名稱: Argipressin AcetateCGG結(jié)合蛋白1抗體包裝25g
酰基十字孢堿(PKC-412)英文名稱: AtenololcGMP依賴性蛋白激2抗體包裝5g
匍枝根霉Rhizopus│stolonifer (Ehrenb.) Vuill. 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定胰淀試劑盒隱綠原;Cryptochlorogen
美澳型核果褐腐病菌Monilinia│fructicola (G. Winter) Honey 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR胰淀粉試劑盒氧化槐果堿 ;Oxysophocarpi
紅緣擬層孔菌Fomitopsis│pinicola (Sw.) P. Karst. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品胰島抗原2抗體/蛋白酪磷抗體試劑盒鹽益母草堿;Leonurine hyd
Hoechst 33258 染色液(即用型)孔狀短小莖點(diǎn)霉 5-氯-3-羧酸氧化低密度脂蛋白IgM抗體Elisa
枯草芽孢桿 阿替美唑鞘脂Elisa
申氏不動(dòng)桿* 2-溴-5-(易)全式鈷氨2Elisa
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致密曲霉 3-氯-2,4-二羥基吡啶谷氨酸受體2A抗體Elisa
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