以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
本Hoechst 33342染色液為即用型,可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色,也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。 Hoechst 33342,也稱bisBenzimide H 33342或HOE 33342,是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33342染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst 33342也常用于普通的細(xì)胞核染色,或常規(guī)的DNA染色。Hoechst 33342的大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm;Hoechst 33342和雙鏈DNA結(jié)合后,大激發(fā)波長(zhǎng)為350nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。 儲(chǔ)存條件:-20℃避光,有效期一年。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
比卡魯英文名稱: Atenolol結(jié)蛋白樣蛋白CGNL1抗體包裝10g
吡非尼,哌非尼英文名稱: Atorvastatin calcium生長(zhǎng)調(diào)節(jié)蛋白CGREF1抗體包裝50g
吡美莫司;匹美莫司英文名稱: Atorvastatin calcium富含亮軟骨蛋白抗體包裝1g
達(dá)卡巴英文名稱: Azacitidine (5-Azacytidine)軟骨蛋白樣蛋白抗體包裝25g
達(dá)沙替尼(無(wú))英文名稱: Azacitidine (5-Azacytidine)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD3抗體包裝5g
達(dá)沙替尼一合物英文名稱: Azacitidine (5-Azacytidine)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD10抗體包裝100g
地西他濱/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷英文名稱: Azelastine HCl卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD7抗體包裝25g
多韋替尼乳鹽英文名稱: Azelastine HClATP依賴的解旋CHD1抗體包裝5g
多烯紫杉三合物英文名稱: Azithromycin染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白抗體包裝100g
多烯紫杉無(wú)/多西他賽英文名稱: Azithromycin染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白2抗體包裝25g
二磺拉帕替尼英文名稱: Aztreonam染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白3抗體包裝5g
二氫卟吩e6英文名稱: Aztreonam染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白Mi2β抗體包裝1g
凡德他尼英文名稱: Baccatin IIIATP依賴的解旋CHD6抗體包裝5g
反鉑英文名稱: Baccatin IIIATP依賴的解旋CHD7抗體包裝1g
達(dá)拉賓英文名稱: BaclofenATP依賴的解旋CHD8抗體包裝25g
: A208資源名稱: 淺紫灰鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR胰島抗體試劑盒楊梅苷;Myricitrin
易變鏈霉菌Streptomyces│mutabilis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品胰島自身抗體試劑盒*泊苷;Etoposide
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)≥1300U/MG,BR胰島原試劑盒煙酰;Nicotinamide
Hoechst 33342 染色液(即用型)*蜜環(huán) 5-乙酰基嘧啶金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白4Elisa
波茨坦芽孢桿 壬二酸二(2-乙基己基)酯骨保護(hù)配體Elisa
新城疫病 2-氯-5-硝基嘧啶骨保護(hù)配體Elisa
藤黃檀根瘤 2--4-氟苯甲型肝炎病Elisa
大腸埃希氏桿 普侖司特丁型肝炎病Elisa
黑靈芝 [1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基][[2-(1-甲基-2-氧代氧基)苯基]亞單純皰疹病IElisa
釀酒酵母 4-氟間苯二酚單純皰疹病IIElisa
鏈霉 (R)-(-)-1-氨基茚鹽酸鹽單純皰疹病IIIElisa
短密青霉 DL-白氨酸瘤病Elisa
巨大芽胞桿 1-氯-4-丁烷金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白7Elisa
木層孔 2-吡啶丁酸金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白12Elisa
泡囊短波單胞 三己角蛋白18-M65Elisa
*蜜環(huán) 1,3,5-三(4-氨基苯氧基)苯血管緊張轉(zhuǎn)化2Elisa
節(jié)桿 2,5-二氯吡啶-4-甲R(shí)HOGElisa
長(zhǎng)孢鏈霉 2-苯基二酰ARHGAP9Elisa