以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
正常細(xì)胞/凋亡細(xì)胞/壞死細(xì)胞檢測(cè)試劑盒是采用DNA探針雙染細(xì)胞核的方法檢測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)。染色液A可以透過(guò)正常細(xì)胞膜,而細(xì)胞凋亡后,細(xì)胞膜對(duì)染色液A的通透性增加,染色液B 不能透過(guò)細(xì)胞膜,對(duì)正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞不能染色,而對(duì)壞死細(xì)胞可以染色。用兩種染色液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙染后,使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡即可對(duì)細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上,這三群細(xì)胞表現(xiàn)分別為:正常細(xì)胞為低藍(lán)色/低紅色(A+/B+),凋亡細(xì)胞為高藍(lán)色/低紅色(A++/B+),壞死細(xì)胞為低藍(lán)色/高紅色(A+/B++)。 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融。 有效期:一年。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
卡非佐米英文名稱(chēng): Bleomycin sulfate分裂周期相關(guān)蛋白4抗體包裝100g
卡奈替尼英文名稱(chēng): Bortezomib色b5抗體包裝25g
康普瑞汀英文名稱(chēng): Bortezomib鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體包裝100g
康普瑞汀磷二鈉鹽英文名稱(chēng): Bosutinib,SKI-6061號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框186抗體包裝25g
克拉曲濱,克拉利賓英文名稱(chēng): BudesonideCXC趨化因子16抗體包裝5g
克里唑啼尼;克里唑替尼英文名稱(chēng): Budesonide補(bǔ)體C3cα片段2抗體包裝1g
克羅拉濱/法拉濱英文名稱(chēng): Calcium Folinate補(bǔ)體C3cα 鏈片段1抗體包裝1g
拉帕替尼英文名稱(chēng): Calcium Folinate補(bǔ)體C3dg片段抗體包裝5g
來(lái)那替尼英文名稱(chēng): Camptothecin補(bǔ)體C3g片段抗體包裝1g
雷帕霉/西羅莫司英文名稱(chēng): Camptothecin補(bǔ)體C3d片段抗體包裝25g
雷替曲塞英文名稱(chēng): Canertinib 2HClCD28抗體包裝5g
硫長(zhǎng)春堿英文名稱(chēng): CapecitabineF肌動(dòng)蛋白α2亞基抗體包裝25g
硫長(zhǎng)春新堿/硫基長(zhǎng)春堿英文名稱(chēng): Capecitabine環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝5g
硫長(zhǎng)春質(zhì)堿英文名稱(chēng): Capreomycin Sulfate胱抑A/半胱蛋白抑制劑A抗體包裝100g
魯比替康; 9-硝基英文名稱(chēng): Capreomycin Sulfate離子通道蛋白27抗體包裝25g
枝孢Cladosporium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,可用于培養(yǎng)胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4試劑盒鹽川芎;Ligustrazine H
暫無(wú)Corallibacter│vietnamensis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3試劑盒乙酰白藜蘆;AcetylResvera
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>97%.BR胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2試劑盒遠(yuǎn)志山Ⅲ;polygalaxantho
正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞與壞死細(xì)胞檢測(cè)試劑盒灰色筍殼 3-羥基異煙酸甲酯11,12-EETElisa
疣梗青霉 Fmoc-Phe-Osu14,15-EETElisa
分散泛 2-(4-溴苯基)-2-甲基可溶性Toll樣受體4Elisa
島籃狀 2-基-5-吡啶酸糖類(lèi)抗原125Elisa
球毛殼 偏硅酸鋰 (metals basis)神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)蛋白Elisa
小孢根霉 1,2,3-三苯基胍纖維介蛋白Elisa
人參土成對(duì)桿 2-氨基-6-氯鹽酸鹽TNFSF14Elisa
假單胞屬 2-苯基吡咯烷補(bǔ)體因子H抗體Elisa
更新世肉桿 1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-補(bǔ)體C3轉(zhuǎn)化抗體Elisa
淋病奈瑟 2'-溴-5'-氟苯乙酮金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白13抗體Elisa
海南油脂酵母 硝酸銪(III) 水合物, REacton補(bǔ)體因子IElisa
大腸埃希氏 4-氨基四氫吡喃醋酸鹽血管性血友病因子裂解抗體Elisa
哈茨木霉 6-羥甲基喹啉亮氨酸Elisa
熱脫氮地芽孢桿熱脫氮亞種 (R)-1-Boc-3-二甲氨基吡咯烷異亮氨酸Elisa
茯苓 4,6-二氨基-2-巰基嘧啶纈氨酸Elisa