產(chǎn)品屬性:
中文名稱:PluronicF-127
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:1g
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
Pluronic F-127是一種非離子型表面活性劑,它具有100%的活性并且對細(xì)胞相對無毒性的,常與染料AM酯一起使用,以增強(qiáng)其水溶性。它在低溫下可溶,但是在室溫下成凝膠狀。 使用Pluronic? F-127 作為探針加載助溶劑由于某些AM 酯在水溶液中不溶解,低毒性的Pluronic? F-127 常常被用于促進(jìn)細(xì)胞加載染料。這種非離子型的去污劑在在DMSO 中的終濃度可以達(dá)到20%(w/v)。有時在制備儲液時,也會用到Pluronic? F-127,40 度溫和加熱可以協(xié)助Pluronic? F-127 溶于DMSO,但Pluronic? F-127 可以降低AM 酯的穩(wěn)定性,所以,建議好僅在工作液中使用Pluronic? F-127。 備注:Pluronic? F-127 制備成20%的DMSO 儲液后,避光保存,有效期6 個月。 儲存:RT,有效期12個月。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
鹽替羅非班(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-(?)-Salicin轉(zhuǎn)錄因子ERF抗體包裝1g
鹽替扎尼定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-(?)-Salicin磷化轉(zhuǎn)錄因子ERF抗體包裝5g
鹽頭孢吡肟 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Magnolol真核肽鏈釋放因子1抗體包裝10MG
鹽頭孢噻呋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Magnolol真核肽鏈釋放因子3a抗體包裝1g
鹽頭孢他美酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Esomeprazole magnesium trihydrate表皮生長因子受體底物15抗體包裝5g
鹽土霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rutin內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN1抗體包裝10MG
鹽托烷司瓊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rutin內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN2抗體包裝100g
鹽妥拉唑林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neosperidin dihydrochalcone內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位蛋白ERGI3抗體包裝25g
鹽妥洛特羅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neosperidin dihydrochalcone內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化物蛋白Ero1-Lα抗體包裝5g
鹽萬古霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oxymatrine內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp19抗體包裝25g
鹽維拉帕米(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oxymatrine內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp72抗體包裝5g
鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Andrographolide結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白ESAT6抗體包裝100g
鹽戊乙奎(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Andrographolide真核翻譯起始因子1抗體包裝25g
鹽西替利(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Apigenin上皮粘連調(diào)控蛋白ESRP2抗體包裝500g
鹽溴己新(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ApigeninT和嗜性粒表達(dá)特應(yīng)性皮炎蛋白ETEA抗體包裝1g
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:含量測定糖原磷化同工II試劑盒;Strychnine
菲羅茄畢赤氏酵母Pichia│philogaea 質(zhì)量規(guī)格:>855ug/MG,USP30糖原磷化同工BB試劑盒山姜;Alpinetin
平滑假絲酵母Candida│parapsilosis 質(zhì)量規(guī)格:效價測定糖原磷化試劑盒D-松;D-Pinitol
PluronicF-127假單胞 5-甲基水楊酸抗單鏈DNA抗體;變性DNA抗體Elisa
小孢矛束霉 4-嗎啉乙酸鹽酸鹽磷脂酰肌抗體IgGElisa
米曲霉 1-甲基吡唑-3-磺酰氯磷脂酰肌抗體IgMElisa
霍氏腸桿 1,4-二-2-(易)瘤病16型E6蛋白抗體Elisa
堀越氏芽孢桿 乙酸薄荷酯瘤病16型E7蛋白抗體Elisa
白色念珠 4-氨基-N-甲酰共濟(jì)失調(diào)蛋白Elisa
Marisediminicola 氨酸芐酯擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因Elisa
山茶 扎托布洛芬5核苷酸Elisa
黑曲霉 外-3,6-環(huán)氧-1,2,3,6-四氫鄰苯二甲酸酐核受體輔阻遏物2Elisa
岸海桿狀 2-羥基苯基酸αL巖藻糖苷Elisa
葡萄座腔屬 2-溴苯酸乙酯弗里德賴希共濟(jì)失調(diào)蛋白Elisa
糙孢籃狀 [1,3-二(2,4,6-苯基)-2-亞咪唑烷基]二氯-(3-苯基-1H-茚-1-亞基)(三環(huán)己抗BP180-IgE抗體Elisa
綠色木霉=木木霉 5-氯-2,3-二氟吡啶抗BP230-IgE抗體Elisa
堅強(qiáng)芽孢桿 4,6-二甲氧基-2-(苯氧基羰基)氨基嘧啶甘露糖Elisa
扣囊復(fù)膜孢酵母 (S)-3-氨基-3-(4-)酸甲酯血小板膜糖蛋白ⅡbElisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)