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詳細(xì)介紹
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
100T | 1～3天 |
商品介紹：
Hoechst33342/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是采用DNA探針雙染細(xì)胞核的方法檢測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)。Hoechst33342染色液A可以透過正常細(xì)胞膜，而細(xì)胞凋亡后，細(xì)胞膜對(duì)Hoechst33342染色液A的通透性增加，PI染色液B不能透過細(xì)胞膜，對(duì)正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞不能染色，而對(duì)壞死細(xì)胞可以染色。用兩種染色液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙染后，使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡即可對(duì)細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上，這三群細(xì)胞表現(xiàn)分別為：正常細(xì)胞為低藍(lán)色/低紅色(A+/B+)，凋亡細(xì)胞為高藍(lán)色/低紅色(A++/B+)，壞死細(xì)胞為低藍(lán)色/高紅色(A+/B++)。 儲(chǔ)存條件：A液和B液-20℃避光保存。C液2-8℃保存。 有效期：一年。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
蘋果舒尼替尼英文名稱： Clarithromycin 濃縮2復(fù)合亞基D3抗體包裝500g
羥基脲英文名稱： Clarithromycin 磷化分裂周期蛋白6抗體包裝1g
曲美替尼英文名稱： Clindamycin Phosphate磷化周期依賴激2抗體包裝5g
塞卡替尼英文名稱： Clindamycin Phosphate碳酐12抗體包裝1g
三亞乙基硫代磷酰英文名稱： Clofarabine泛載體蛋白R(shí)2抗體包裝250mg
色瑞替尼,LDK378英文名稱： Clotrimazole粘附分子3抗體包裝5g
舒尼替尼堿英文名稱： Clotrimazole整合相關(guān)蛋白CD47包裝1g
順鉑英文名稱： Colchlcine磷化角蛋白8抗體包裝5g
司莫司汀英文名稱： Colchlcine鈣結(jié)合蛋白D28K抗體包裝100g
他克莫司英文名稱： Colistin Sulphate磷化接頭蛋白CrkL抗體包裝100g
他米巴羅汀英文名稱： Colistin Sulphate磷化接頭蛋白CrkL抗體包裝25g
坦度替尼;MLN518英文名稱： Eflornithine HCl促腎上腺皮質(zhì)釋放激受體1抗體包裝500g
坦西莫司， 西羅莫司脂化物英文名稱： Cromolyn sodium磷化絲切蛋白抗體包裝1g
替拉替尼英文名稱： Cromolyn sodium皮層肌動(dòng)蛋白抗體包裝5g
替莫唑英文名稱： Cyclosporine A促腎上腺皮質(zhì)釋放激受體2抗體包裝25g
ATCC-VR31資源名稱: 人?？虏《?質(zhì)量規(guī)格：HPLC含量測(cè)定胰島樣生長(zhǎng)因子2 mRNA結(jié)合蛋白2試劑盒異香蘭;Isovanillin
AS2.541資源名稱: 釀酒酵母 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%,BR胰島樣生長(zhǎng)因子1受體試劑盒原阿片堿;Protopine
異常漢遜酵母異常變種Hansenula│anomala var. anomala 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR胰島樣生長(zhǎng)因子1試劑盒異龍腦;DL-Isoborneol
Hoechst33342/PI雙染試劑盒黃曲霉 D730大孔徑強(qiáng)堿性陰離子樹脂脂肪分化相關(guān)蛋白Elisa
冬菇 美洛培南三水合物鈣;鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激1DElisa
屎腸球 銅鐵試劑一氧化氮Elisa
短小芽孢桿 更名不慌供應(yīng) 鉻片熱休克70kDa蛋白12AElisa
絨邊膠盤孢 硫酸鈦熱休克蛋白Elisa
大豆擬莖點(diǎn)種腐病 XDA-1B大孔樹脂磷酸甘油酸變位5Elisa
杏鮑菇 水溶性霍霍巴油淀粉樣蛋白Elisa
肺形側(cè)耳 吡咯喹啉醌組氨酸Elisa
大腸埃希氏 7,8-二羥基黃酮單純皰疹病1抗體Elisa
枯草芽孢桿 硬脂酰乳酸鈉巨噬集落激因子Elisa
枯草芽孢桿 甜橙油轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子Elisa
小紅酵母 20-120kDa預(yù)先染色分子量MARK絲裂原活化蛋白激1Elisa
枯草芽孢桿 胎牛血清500ml/XQ-B0500二酸單酰Elisa
球形節(jié)桿 胎牛血清100ml/XQ-B0100間接膽紅Elisa
米曲霉 胎牛血清50ml/XQ-B0050朊病蛋白Elisa
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