商品介紹:
用途: 又稱(chēng)監(jiān)牢藍(lán)髓鞘染色,石蠟切片 注意事項(xiàng): 分化步驟很重要,染色結(jié)果為:髓鞘呈藍(lán)綠色,細(xì)胞核呈紅色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
香蒲新苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Nardosinone載脂蛋白AI調(diào)節(jié)蛋白1抗體包裝100g
香薷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Praeruptorin B黑色瘤硫軟骨蛋白多糖抗體包裝25g
香葉木-7-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Atractylenolide II核蛋白易位啟動(dòng)子區(qū)域TPR抗體包裝500g
香葉木(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Clinodiside A核因子1X抗體包裝100mg
香櫞(枸櫞)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Sauchinone環(huán)指蛋白107抗體包裝1g
香櫞(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Emodin-8-glucoside軸突生長(zhǎng)誘向因子G1配體抗體包裝250mg
香紫蘇(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Isoliensinine神經(jīng)前體表達(dá)發(fā)育下調(diào)蛋白5抗體包裝100g
香紫蘇內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Liensinine Perchlorate軸突生長(zhǎng)誘向因子4抗體包裝25g
襄五脂英文名稱(chēng): 3-Butylidenephthalideγ-分泌組件蛋白NCLN抗體包裝500g
消旋山莨菪堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Pachymic acid核受體蛋白NR2E3抗體包裝100g
小白菊內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Corilagin絲/蘇蛋白激NEK8抗體包裝25g
小駁骨(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Ginsenoside F3核孔蛋白Nup37抗體包裝500g
小檗紅堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Sophoridine核結(jié)構(gòu)蛋白5抗體包裝500mg
小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Demethylzeylasteral核苷結(jié)合蛋白1抗體包裝25g
小檗皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Harmine hydrochloride核苷結(jié)合蛋白2抗體包裝5g
植物乳桿菌Lactobacillus│plantarum 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)緊密連接蛋白1試劑盒柴胡皂苷B2;Saikosaponin
纖維堆囊菌Sorangium│cellulosum 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1試劑盒甘草查爾;Echinatin
彼爾姆短桿菌Brevibacterium│permense 質(zhì)量規(guī)格:AR,98%金屬硫蛋白2試劑盒穿心蓮新苷 ;Neoandrograph
Luxol Fast Blue染色液黑曲霉 乙酸松油酯嗜酸粒趨化因子Elisa
熱帶假絲酵母 姜黃油嗜酸性粒陽(yáng)離子蛋白Elisa
球孢白僵 3-氨基-4-羥基-N-磺酰瘦Elisa
漆柄小孔 3--7-氮雜瘦受體Elisa
血痕韌革 N-CBZ-4-乙酸乙酯鼠泰澤病原體Elisa
梅林青霉 3-氟-5-(三氟甲基)-2-吡啶甲雙解絲蛋白1Elisa
鏈霉 3--5-三氟-2-羧酸雙氫睪酮Elisa
聚生殼 3--5(三氟甲氧)苯甲水痘帶狀皰疹病IgG抗體Elisa
葡萄座腔 2H-1,2,3-三氮唑-2-乙酸水通道蛋白1Elisa
粟酒裂殖酵母 4-溴-3-甲氧基苯甲水通道蛋白2Elisa
大腸埃希氏 2-溴-4-甲氧基苯甲水通道蛋白3Elisa
阿舒假囊酵母 N-甲基高哌水通道蛋白4Elisa
干草鞘氨單胞 反,反-2,4-庚二烯水通道蛋白5Elisa
杰丁畢赤酵母 2-氟烯酸水通道蛋白7Elisa
雞樅(雞) 5-甲基-3,4-二氫噻吩并[2,3-D]嘧啶-4-酮水通道蛋白9Elisa