詳細(xì)介紹
商品介紹:
AO/EB雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是采用DNA探針雙染細(xì)胞核的方法檢測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)。橙(AO)具有膜通透性,能透過(guò)細(xì)胞膜,使核DNA和RNA染色。其激發(fā)波長(zhǎng)為488nm,吸收波長(zhǎng)為515nm。它與細(xì)胞中DNA和RNA 結(jié)合量存在差別,復(fù)合物可發(fā)出不同顏色的熒光,紅色熒光為AO-DNA(F>600nm),綠色熒光為AO-RNA或單鏈DNA(F>530nm)。因此,在熒光顯微鏡下觀察,橙可透過(guò)正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細(xì)胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。橙AO 常與溴化乙啶EB 合用雙染,因EB 只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。 儲(chǔ)存條件:A液和B液-20℃避光保存。C液2-8℃保存。 有效期:一年。 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:AO/EB雙染試劑盒
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
托瑞米芬英文名稱: Cyclosporine A磷化原癌基因c-kit抗體包裝5g
拓?fù)涮婵蝶}鹽英文名稱: Ticlopidine HCl磷化原癌基因c-kit抗體包裝5g
維酰酚英文名稱: Ticlopidine HCl胸腺基質(zhì)淋巴生成受體抗體包裝25g
維羅非尼,RG7204英文名稱: Cytarabine磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝5g
戊柔比星英文名稱: Cytarabine磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
西地尼布;AZD2171英文名稱: Cytarabine蛋白磷激PKC/CPI-17抗體包裝5g
西地尼布馬來(lái)鹽英文名稱: Dacarbazine磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
亞葉鈣英文名稱: Dacarbazine磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
鹽阿糖胞苷英文名稱: Dasatinib胰輔脂抗體包裝5g
鹽埃羅替尼英文名稱: Dasatinib19號(hào)染色體開放閱讀框45抗體包裝5MG
鹽昂丹司瓊英文名稱: Daptomycin過(guò)氧化氫誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體包裝5MG
鹽達(dá)莫司汀英文名稱: Daptomycin核因子NFκB激活蛋白1抗體包裝100g
鹽表阿霉英文名稱: Daunorubicin HCl第12號(hào)染色體開放閱讀框23抗體包裝25g
鹽多柔比星/鹽阿霉英文名稱: Daunorubicin HClγ-連環(huán)/連接蛋白γ抗體包裝5g
鹽米托蒽醌英文名稱: Daunorubicin HCl10號(hào)染色體開放閱讀框4抗體包裝100g
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定胰島受體底物2試劑盒鹽拓?fù)涮婵?Topotecan hyd
膠孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%胰島受體底物1試劑盒延齡草苷;Diosgenin gluco
小珊瑚球菌Corallococcus│exiguus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99.0%,標(biāo)準(zhǔn)品胰島受體β試劑盒異槲皮;Isoquercitrin
AO/EB雙染試劑盒山羊葡萄球 新生牛血清500ml/XQ-A0500磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD-2Elisa
克魯斯假絲酵母 新生牛血清100ml/XQ-A0100磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD-7Elisa
泡盛曲霉 新生牛血清50ml/XQ-A0050核糖基轉(zhuǎn)移1Elisa
薄層 穩(wěn)定劑,500ml裝/CT-0500脂聯(lián)β樣1Elisa
釀酒酵母 穩(wěn)定劑,200ml裝/CT-0200胰島抗體Elisa
穩(wěn)定劑,50ml裝/CT-0050神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4Elisa
仙芝(靈芝屬之一種) 穩(wěn)定劑,10ml裝/CT-0010血管緊張轉(zhuǎn)化1Elisa
香菇 蛋白/穩(wěn)定劑/PS-050血管緊張轉(zhuǎn)化1Elisa
嗜鹽細(xì)屬 蛋白/穩(wěn)定劑/PS-010流行性出血熱IgG抗體Elisa
短小克銀漢霉 蛋白/穩(wěn)定劑/PS-00115-deoxy-前列腺J2Elisa
傷寒沙門氏 粘附液/301-026-015抗能受體M2抗體Elisa
干草鞘氨單胞 粘附液/301-025-015CD64分子Elisa
黃桿 蛋白膠染液 /300-692-1000磷酸乙酸磷酸Elisa
假單胞屬 蛋白膠染液 /300-692-500p38絲裂原活化蛋白激Elisa
天青鏈霉 AquaSafe 安全保鮮劑/22-100-01神經(jīng)肽SElisa