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詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
20T | 1～3天 |
商品介紹：
保存條件：-20℃冰凍保存。 保存期：一年 工作原理： 在機體內(nèi)部隨時都在發(fā)生著細胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細胞的死亡，其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚，時間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活，細胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割，出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口，并產(chǎn)生與 DNA 斷點數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標記的dUTP(DIG-dUTP)標記至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 結(jié)合在 DNA 斷點部位，可以通過生物標記的抗抗體(Anti-DIG-Biotin)反應后，再結(jié)合熒光素 FITC或者過氧化物酶 POD 標記的鏈酶親和素(SABC-FITC/SABC-POD)。FITC 在 490-495nm 激化，在 520-530nm 發(fā)射熒光，在熒光顯微鏡下呈明亮黃綠色。POD的在加入顯色底物 DAB 顯色后，凋亡的細胞核呈棕黃色。用戶根據(jù)實驗需要，在不同切片上用兩套不同顯示系統(tǒng)觀察。 試劑盒內(nèi)容： 1．標記緩沖液(Labeling Buffer)1ml 2．末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl 3．DIG-dUTP(×20)20μl 4．封閉液(Blocking Reagent)4ml 5．生物素化抗抗體(× 100)20μl 6．SABC-FITC(× 100)20μl 7．SABC-POD(× 100)20μl 8．Proteinase K(×200)50μl 9．抗體稀釋液 4ml 10．未染色陽性對照片 2 張。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
補體1抑制因子(C1INH)英文名稱：C1INH ELISA Kit9號染色體開放閱讀框86抗體包裝5g
補體1q(C1q)英文名稱：C1q ELISA Kit鈣粘附分子18抗體包裝25g
脫氫磷(PDP)英文名稱：PDP ELISA KitCD276抗體包裝5g
脫氫激同工4(PDK4)英文名稱：PDK4 ELISA Kit21號染色體開放閱讀框25抗體包裝1g
脫氫β(PDHβ)英文名稱：PDHβ ELISA Kit22號染色體開放閱讀框36抗體包裝5g
脫氫α(PDHα)英文名稱：PDHα ELISA Kit補體組分1q子成分樣蛋白1抗體包裝1g
羧化(PC)英文名稱：PC ELISA KitCD44抗體包裝25g
糖磷異構(gòu)1(TPI1)英文名稱：TPI1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框114抗體包裝5g
別孕烯(AP)英文名稱：AP ELISA KitCD8β鏈（CD8-β）抗體包裝100mg
表皮轉(zhuǎn)谷酰胺(TGM3)英文名稱：TGM3 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框1抗體包裝25g
表皮調(diào)節(jié)(EREG)英文名稱：EREG ELISA Kitγ晶狀體蛋白S/γS-crystallin抗體包裝5g
表皮生長因子受體2(EGFR2)英文名稱：EGFR2 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框72抗體包裝25g
表面活性物質(zhì)關聯(lián)蛋白D(SPD)英文名稱：SPD ELISA Kit鈣粘附分子10抗體包裝5g
表面活性物質(zhì)關聯(lián)蛋白A(SPA)英文名稱：SPA ELISA KitR Cadherin/CDH4包裝25g
表睪(ET)英文名稱：ET ELISA Kit大鼠細小病H-1株(H-1)抗體包裝5g
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR幽門螺旋菌IgG試劑盒乙酰蝙蝠葛蘇林堿;O-diacetyld
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品幽門螺旋桿菌IgM試劑盒一葉萩堿;Securinine
膠孢刺盤孢Colletotrichum│gloeosporioides 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR硬骨試劑盒異葒草; Homoorientin
細胞凋亡檢測試劑盒IV(FITC+POD)纖維纖維微 甘氨酸銅風疹病抗體Elisa
冷溫木拉克酵母 硅酸四鈉鹽吸血蟲抗體Elisa
斯氏土地桿 2-甲基-1,3-苯并惡唑-6-羧酸CD34分子Elisa
大腸埃希氏 雙(4-基苯基)甲腫瘤干標記物Elisa
弗雷德里克斯堡假單胞 3-溴-2,6-二甲氧基吡啶Parkin蛋白Elisa
克魯斯假絲酵母 5''-溴-3,3''-二辛基-[2,2':5',2''-三噻吩]-5-甲維生BElisa
小殼焦孢屬 羥鈷金黃色葡萄球腸BElisa
釀酒酵母 3-氟-5-溴苯金黃色葡萄球腸CElisa
釀酒酵母 棕櫚酸異辛酯金黃色葡萄球腸EElisa
蠟狀芽孢桿 2,4-二氯煙前列腺H2Elisa
蘇云金芽孢桿 2-乙黃原酸基異丁酸超氧化物歧化Elisa
白僵 (1R,2R)-2-氨基環(huán)己鹽酸鹽二氫蝶啶還原Elisa
傳染性喉氣管炎病 (1S,2S)-2-氨基環(huán)己鹽酸鹽CD73分子Elisa
釀酒酵母 肉桂肟, mixed isomers7-脫氫膽固還原Elisa
矩圓黑盤孢 2-氨基-5-溴-4-甲基噻唑鹽酸鹽肝微粒體混合功能氧化Elisa
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