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空腸彎曲菌樣品處理和分離
閱讀:376 發(fā)布時間:2017-3-9菌種培養(yǎng)樣品處理
1.空腸彎曲菌一般樣品
取25g(mL)樣品(水果、蔬菜、水產(chǎn)品為50g)加入盛有225mL Bolton肉湯的有濾網(wǎng)的均質(zhì)袋中(若為無濾網(wǎng)均質(zhì)袋可使用無菌紗布過濾),用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)1min~2min,經(jīng)濾網(wǎng)或無菌紗布過濾,將濾過液進(jìn)行培養(yǎng)。
2.整禽等樣品
用200mL0.1%的蛋白胨水中充分沖洗樣品的內(nèi)外部,并振蕩2min~3min,經(jīng)無菌紗布過濾至250mL離心管中,16000g離心15 min后棄去上清,用10 mL 0.1%蛋白胨水懸浮沉淀,吸取3 mL于100 mLBolton肉湯中進(jìn)行培養(yǎng)。
3.貝類
菌種培養(yǎng)取至少12個帶殼樣品,除去外殼后將所有內(nèi)容物放到均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)1min~2min,取25g樣品至225 mLBolton肉湯中(1:10稀釋),充分震蕩后再轉(zhuǎn)移25mL于225 mLBolton肉湯中(1:100稀釋),將1:10和1:100稀釋的Bolton肉湯同時進(jìn)行培養(yǎng)。
4.蛋黃液或蛋漿
取25 g(mL)樣品于125mLBolton肉湯中并混勻(1:6稀釋),再轉(zhuǎn)移25mL于100mLBolton肉湯中并混勻(1:30稀釋),同時將1:6和1:30稀釋的Bolton肉湯進(jìn)行培養(yǎng)。
5.鮮乳、冰淇淋、奶酪等
若為液體乳制品取50g;若為固體乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨水的有濾網(wǎng)均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)15s~30 s,保留過濾液。必要時調(diào)整pH值至7.5±0.2,將液體乳制品或?yàn)V過液以20000g 離心30 min后棄去上清,用10 mL Bolton肉湯懸浮沉淀(盡量避免帶入油層),再轉(zhuǎn)移至90 mLBolton肉湯進(jìn)行培養(yǎng)。
6.需表面涂拭檢測的樣品
無菌棉簽擦拭檢測樣品的表面(面積至少100 cm2以上),將棉簽頭剪落到100 mLBolton肉湯中進(jìn)行培養(yǎng)。
7.水樣
將4 L 的水(對于氯處理的水,在過濾前每升水中加入5 mL1mol/L硫代硫酸鈉溶液)經(jīng)0.45 μm濾膜過濾,把濾膜浸沒在100 mL Bolton肉湯中進(jìn)行培養(yǎng)。
菌種培養(yǎng)分離
將24 h增菌液、48 h增菌液及對應(yīng)的1:50稀釋液分別劃線接種于Skirrow血瓊脂與mCCDA瓊脂平板上,微需氧條件下42 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h~48 h。另外可選擇使用空腸彎曲菌顯色平板作為補(bǔ)充。
觀察24 h培養(yǎng)與48 h培養(yǎng)的瓊脂平板上的菌落形態(tài),mCCDA瓊脂平板上的可疑菌落通常為淡灰色,有金屬光澤、潮濕、扁平,呈擴(kuò)散生長的傾向。Skirrow血瓊脂平板上的*型可疑菌落為灰色、扁平、濕潤有光澤,呈沿接種線向外擴(kuò)散的傾向;第二型可疑菌落常呈分散凸起的單個菌落,邊緣整齊、發(fā)亮??漳c彎曲菌顯色培養(yǎng)基上的可疑菌落按照說明進(jìn)行判定。