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微生物菌種的分離和培養(yǎng)
閱讀：452 發(fā)布時(shí)間：2017-10-9微生物菌種組織分離培養(yǎng)法
利用子實(shí)體內(nèi)部組織，進(jìn)行無性繁殖而獲得母種的簡便方法，即組織分離。該法操作簡便，菌絲生長發(fā)育快，品種特性易保存下來，特別是雜交育種后，優(yōu)良菌株用組織分離法能使遺傳特性穩(wěn)定下來。常采用以下分離方法。
（l）子實(shí)體分離：種菇要選朵大蓋厚，柄短，八九分成熟的優(yōu)良品種。切去菇兩基部，在無菌箱內(nèi)以0.1％汞水浸幾分鐘，再用無菌水沖洗并揩干或用75％酒精棉球擦拭菌蓋與菌柄2次，進(jìn)行表面消毒。接種時(shí)，只要將種菇撕開，在萌蓋和菌柄交界處或菌褶處，挑取一小塊組織；移接 到PDA培養(yǎng)基上。置25℃左右溫度下培養(yǎng)3-5天，就可以看到組織上產(chǎn)生白色絨毛狀菌絲，轉(zhuǎn)管擴(kuò)大即得到菌種。如香菇、平菇等可以用此方法。
（2）菌核分離：茯苓、豬苓、雷丸等菌的子實(shí)體不易采集。而常見的是它貯藏營養(yǎng)的菌核。用菌核分離，同樣可以獲得菌種。方法是將菌核表面洗凈，用酒精消毒后，切開菌核，取中間組織一小塊，約黃豆大小，接種在PDA 培養(yǎng)基斜面上，保溫培養(yǎng)。應(yīng)注意的是，菌核是貯藏器官，大部分是多糖類物質(zhì)，只含有少量的菌絲，因此挑取的組織塊要大一些，如果組織塊過小，則不易分出菌種。
（3）菌素分離：有一部分子實(shí)體不易找到，也沒有菌核，可以用菌素進(jìn)行分離。如蜜環(huán)菌、假蜜環(huán)菌。其操作方法是先用酒精將菌素表面黑色皮層輕輕擦拭2～3次， 然后去掉黑色外皮層（菌鞘），抽出白色菌髓部分；用無菌剪刀將菌髓剪一小段，接種在培養(yǎng)基上，保溫培養(yǎng)，即得該菌菌種。
菌素分離要注意：因菌素比較細(xì)小，分離素也比較細(xì)小，分離時(shí)極易污染雜菌，所以要嚴(yán)格操作。
3．基內(nèi)菌絲分離培養(yǎng)法
利用食用菌生育的基質(zhì)作為分離材料，來得到純菌種的一種方法，叫基內(nèi)菌絲分離法。
此種分離方法是適宜只有在特定的季節(jié)才出現(xiàn)，而且是朝生暮死，不易采得的子實(shí)體?；鶅?nèi)分離法與組織分離法不同之點(diǎn)是，干燥的菇木或耳木中的菌絲常呈休眠狀態(tài)。接種后有時(shí)并不立刻恢復(fù)生長。因此，有必要保留較長的時(shí)間（約1個(gè)月），以斷定菌絲是否能成活。基內(nèi)菌絲分離法又可分為，材中菌絲分離（即菇木或耳木分離法）及土中菌絲分離法等。
（1）材中菌絲分離法：就是菇木或耳木分離法，為了減少雜菌的感染，菇（耳）木在分離之前，必須進(jìn)行無菌處理?？梢园压剑ǘ┧砻嬗镁凭珶艋鹧孑p輕燒過，以燒死霉菌的孢子，或再用0.1％水浸孢幾分鐘，然后用無菌水沖洗后用無菌濾紙吸干。接種塊切取時(shí)應(yīng)注意。接種塊必須在該菌菌絲分布的范圍內(nèi)切取。所以，菌絲生長緩慢的種類應(yīng)淺??；菌種生長快的種類可以深取。同時(shí)。還應(yīng)根據(jù)菇菌的種類、木材質(zhì)地、菇（耳）木粗細(xì)、發(fā)育時(shí)間的長短來確定菌絲分布的范圍。然后用一把利刀進(jìn)行切取。接種塊應(yīng)盡量小些，以減少雜菌感染機(jī)會(huì)，提離菌種的純度。接種塊移到培養(yǎng)基上，就應(yīng)該放到適合菌絲生長的22℃～26℃ 的溫室或溫箱中培養(yǎng)，使菌絲恢復(fù)生長。
（2）土中菌絲分離：食用菌種類很多，許多土生的食用菌；孢子不易萌發(fā)。組織分離也不易成功，用土中菌絲分離獲得純種的方法，叫土中菌絲分離。
土中菌絲分離時(shí)要注意，由于土中菌絲體的周圍生活著多種多樣的土壤微生物，因此分離時(shí)必須盡可能避開這些微生物的干擾，盡可能批取清潔菌絲素的、不帶雜物的菌絲接種，反復(fù)用無菌水沖洗，在培養(yǎng)基中加入一些抑制細(xì)菌 生長的藥物，如 40微克／升的鏈霉素或金霉素。如發(fā)現(xiàn)感染細(xì)菌，可以把菌落邊緣的菌絲挑出來，接種到木屑培養(yǎng)基中。因細(xì)菌沒有分解木質(zhì)素的能力，因此在木屑培養(yǎng)基中不易擴(kuò)展；只局限于接種處。待菌絲長出感染區(qū)后，就可以再進(jìn)行擴(kuò)大提純了。
（3）微生物菌種子實(shí)體基部分離：從瓶栽、袋栽或大床栽培的子實(shí)體基部分離出新菌絲的方法，叫子實(shí)體基部分離，現(xiàn)以袋栽銀耳為例說明:從出耳早、出耳率離、無病蟲害的栽培室中；選擇生活力zui強(qiáng)的幼耳5袋，移到氣候溫和，有散射光的野外場所進(jìn)行后期培養(yǎng)，以增強(qiáng)菌絲體的生活力。經(jīng)培養(yǎng)7～10天后，待子實(shí)體直徑達(dá)4～5厘米時(shí)便可取回，作為分離的母體。再從中篩選的一朵，用利刀割掉銀耳子實(shí)體，放置于 0℃的冰箱或有敵敵畏的容器中過夜，以便殺死瓶中的害蟲。然后用75％酒精擦洗耳基和袋子外邊的雜質(zhì)，連同接種工具、接種培養(yǎng)基等移進(jìn)無菌室。經(jīng)滅菌后，用接種刀把袋口上部約15毫米厚的老菌根挖除，并進(jìn)行培養(yǎng)。待袋口露出白色菌絲時(shí)，用接種針挑取一塊半粒米大的白色菌結(jié)體，迅速移入母種試管培養(yǎng)基的中央，輕輕地脫去接種針， 塞上棉塞。 為了能夠獲得較多的母種，一次接種量要有100—200支試管，以便從中選擇。分離后應(yīng)及時(shí)移入22℃—24℃恒溫箱或溫室中培養(yǎng)。由于培養(yǎng)基內(nèi)水分較多，菌絲恢復(fù)要比耳木分離得快。經(jīng)2-3天后，分離物的邊緣就可看 到白色菌絲。每天要至少觀察兩次，以便提純。觀察、提純方法與耳木分離法擔(dān)同。經(jīng)適溫培養(yǎng)10-15天后，當(dāng)接種塊扭結(jié)團(tuán)出現(xiàn)紅、黃色水珠時(shí)，即可擴(kuò)大原種。
54-21-7 水楊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Sodium Salicylate 500mg
54197-66-9 西洛他唑相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
54143-56-5 醋酸氟卡尼標(biāo)準(zhǔn)品 Flecainide Acetate 200mg
541-22-0 溴化十烴季胺標(biāo)準(zhǔn)品 Decamethonium Bromide 250mg
541-15-1 左卡尼汀標(biāo)準(zhǔn)品 Levocarnitine 400mg
5411-22-3 鹽酸芐非他明標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
540-59-0 (1,... 二類殘留溶劑-1,2-二氯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品 1.2ml×3ampules
54048-10-1 去氧孕烯相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
54024-22-5 去氧孕烯標(biāo)準(zhǔn)品 Desogestrel 50mg
540-10-3 棕櫚酸棕櫚酯標(biāo)準(zhǔn)品 Cetyl Palmitate 50mg
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