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          公司動態(tài)

          菌種培養(yǎng)冷凍干燥保藏法

          閱讀:104          發(fā)布時間:2017-10-25

          (1)菌種培養(yǎng)準備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃,形狀可用長頸球形底的,亦稱淚滴型安瓿管,大小要求外徑6—7.5mm,長105mm,球部直徑9—11mm,壁厚0.6—1.2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞,1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘,備用。

          (2)準備菌種,用冷凍干燥法保藏的菌種,其保藏期可達數(shù)年至十數(shù)年,為了在許多年后不出差錯,故所用菌種要特別注意其純度,即不能有雜菌污染,然后在zui適培養(yǎng)基中用zui適溫度培養(yǎng),使培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物。細菌和酵母的菌齡要求超過對數(shù)生長期,若用對數(shù)生長期的菌種進行保藏,其存活率反而降低。一般,細菌要求24—48小時的培養(yǎng)物;酵母需培養(yǎng)3天;形成孢子的微生物則宜保存孢子;放線菌與絲狀真菌則培養(yǎng)7—10天。

          (3)制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例,用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中,制成濃菌液,每支安瓿管分裝0.2ml。

          (4)冷凍冷凍干燥器有成套的裝置出售,價值昂貴,此處介紹的是簡易方法與裝置,可達到同樣的目的。

          將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍,無低溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2>)酒精液或干冰丙酮液,溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑,只需冷凍4—5分鐘,即可使懸液結(jié)冰。

          (5)真空干燥為在真空干燥時使樣品保持凍結(jié)狀態(tài),需準備冷凍槽,槽內(nèi)放碎冰塊與食鹽,混合均勻,可冷至-15℃。

          抽氣一般若在30分鐘內(nèi)能達到93.3Pa(0.7mmHg)真空度時,則干燥物不致熔化,以后再繼續(xù)抽氣,幾小時內(nèi),肉眼可觀察到被干燥物已趨干燥,一般抽到真空度26.7Pa(0.2mmHg),保持壓力6—8小時即可。

          (6)封口抽真空干燥后,取出安瓿管,菌種培養(yǎng)接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管繼續(xù)抽氣,約10分鐘即可達到26.7Pa(0.2mmHg)。于真空狀態(tài)下,以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中央進行封口。封口以后,保存于冰箱或室溫暗處。
          苷松新酮    20mg    供鑒別用    111832-201001
          6-姜辣素    0.2ml    供含量測定用    111833-201001
          1-甲基海因    20mg    供鑒別    111836-201001
          安五脂素    20mg    供鑒別用    111844-201001
          23-乙酰澤瀉醇B    20mg    含量測定    111846-201001
          3,6-二芥子酰基蔗糖    20mg    供含量測定    111848-201001
          遠志口山酮    20mg    供含量測定    111850-201001
          寶藿苷Ⅰ    20mg    供含量測定用    111852-201001
          王不留行黃酮苷    20mg    供含量測定用    111853-201001
          槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖    20mg    供含量測定用    111854-201001
          菌種培養(yǎng)

           

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