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ATCC菌種轉(zhuǎn)化的操作步驟
閱讀:390 發(fā)布時(shí)間:2017-11-15ATCC菌種轉(zhuǎn)化操作步驟
(1)事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃。
(2)從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管(100μl)感受態(tài)菌,立即用手指加溫融化后插入冰上,冰浴5~10min。
(3) 加入5μl連接好的質(zhì)?;旌弦海―NA含量不超過(guò)100ng),輕輕震蕩后放置冰上20min。
(4) 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進(jìn)行熱休克,然后迅速放回冰中,靜置3~5min。
(5) 在超凈工作臺(tái)中向上述各管中分別加入500μl LB培養(yǎng)基(不含抗菌素)輕輕混勻,然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.
(6) 在超凈工作臺(tái)中取上述轉(zhuǎn)化混合液100~300μl,分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養(yǎng)皿中,用酒精燈燒過(guò)的玻璃涂布棒涂布均勻(注意:玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻,待其冷卻后再涂)。
(7) 如果載體和宿主菌適合藍(lán)白斑篩選的話,滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal,8μl 20% IPTG,用酒精燈燒過(guò)的玻璃涂布棒涂布均勻。
(8) 在涂好的培養(yǎng)皿上做上標(biāo)記,先放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后,再倒置過(guò)來(lái)放入37℃恒溫培養(yǎng)箱過(guò)夜。
(9)ATCC菌種在被細(xì)菌污染的桌面上噴灑70%乙醇,擦干桌面,寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
(10)觀察平板上長(zhǎng)出的菌落克隆,以菌落之間能互相分開(kāi)為好。注意白色菌斑。
磺卞青霉素等的效價(jià)測(cè)定 Antibiotic Agar 抗生素1號(hào)培養(yǎng)基(PH6.5-6.6) 250克
磺胺類的無(wú)菌試驗(yàn)用 PABA Medium(Bacteria) PABA培養(yǎng)基(需氧、厭氧菌) 250克
環(huán)氧乙烷消毒和電離輻射消毒過(guò)程檢測(cè)指示菌(枯草桿菌黑色變種芽孢及短小桿菌芽孢)培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn)) 0.5% Dextrose Broth Medium 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 250克
化妝品微生物檢測(cè) TAT Broth 胰蛋白胨大豆卵磷脂聚山梨酸酯瓊脂 250克
化妝品檢驗(yàn)中樣品制備、增菌 SCDLP Broth Medium SCDLP液體培養(yǎng)基 250克
化妝品檢驗(yàn)中細(xì)菌計(jì)數(shù) Lecithin Tween 80 Nutrient Agar 卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂 250克
弧菌的分離培養(yǎng) MCPC Medium MCPC培養(yǎng)基 250克
含L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉 RPMI 1640 1640培養(yǎng)基 10升
含L-谷氨酰胺,不含NaHCO3 F-12 Nutrient Mixture F-12營(yíng)養(yǎng)混合物 10升
ATCC菌種