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上海雅吉生物科技有限公司
人類胚胎干細胞H9培養(yǎng)方法
培養(yǎng)操作及注意事項說明
一．產(chǎn)品簡介
1、細胞名稱：H9 ；人類胚胎干細胞
2、生長特性： □ 貼壁□ 懸浮□半懸浮半貼壁
3、細胞生長條件：
培養(yǎng)條件DMEM/F12+10%FBS+1%P/S
溫度37℃
空氣條件5% CO2,95% AIR
傳代方法1:2 傳代，2~3 天換液
凍存條件90%FBS+10%DMSO
二．使用方法
1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出25cm2 培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2
細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4 小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)
或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用
PBS 清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待
細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后
將懸液轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中，1000rpm 離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml *培養(yǎng)基重懸，然后按1:2 比例進行分瓶傳
代，后放入37℃，5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
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人類胚胎干細胞H9培養(yǎng)方法
4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用
PBS 清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待
細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將
懸液轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中，1000rpm 離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)
入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃
水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml *培養(yǎng)基的15ml 離心管中， 1000rpm
離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml *培養(yǎng)基重懸，接種25cm2 培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2
細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。人類胚胎干細胞H9培養(yǎng)方法