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分離或耗盡人CD4+T細(xì)胞-全血，Buffy Coat，MNC
閱讀：403 發(fā)布時間：2018-7-17DyabeADS®與管內(nèi)的細(xì)胞樣品混合。DyabeADS®將在短時間內(nèi)與靶細(xì)胞結(jié)合，然后通過磁體分離珠結(jié)合細(xì)胞。
正隔離-丟棄上清液，并使用珠結(jié)合細(xì)胞用于下游分子應(yīng)用。
耗盡-丟棄被綁定的細(xì)胞，并將剩余的未觸及的細(xì)胞用于任何應(yīng)用程序。
磁鐵（dynal®mpc™）
給出了W-C-傾斜模和兩個混頻器之間的旋轉(zhuǎn)。
緩沖液：0.1% 1 W / BSA和2毫米EDTA，pH值為7.4。
實驗步驟
1。dynabeads®洗滌過程
dynabeads®酸洗前應(yīng)使用。
1）《dynabeads®resuspend在瓶。
（2）轉(zhuǎn)移到所需的dynabeads®卷一管。
3）將存儲在相同的卷1，或至少1毫升，和混合。
4）在一個灌注管和磁鐵1分鐘的supernatant丟棄。
5）把管從磁鐵和在相同的dynabeads®resuspend酸洗卷（1卷）公開發(fā)行（IPO）作為緩沖dynabeads®（步驟2）。
2。樣品的制備
可以直接從任何孤立的細(xì)胞樣本，如全血，骨髓組織，跨國公司或消化。
請訪問我們的www.invitrogen。。ｃｏｍ / cellisolation和后續(xù)的樣品制備過程是快速的。
3。整個血液和巴菲大衣
消耗和積極的隔離的CAN使用捉鬼大衣與整個血液樣本作為一個開始。巴菲大衣是8比10倍更多的集中到整個血與leucocytes數(shù)。這個產(chǎn)品你要洗血/捉鬼大衣刪除干擾性因素。
1）整個血液捉鬼大衣或稀在緩沖區(qū)1（1，2）。
2）在centrifuge 600 x g的10分鐘在2～8°C。
3）等離子層的部分取消/上層。resuspend血到原始卷捉鬼大衣在緩沖區(qū)1和1 1 1添加在緩沖區(qū)之前的磁珠。
4。減少的CD4陽性T細(xì)胞的分離。
1）添加適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)備樣品dynabeads®卷（根據(jù)表1。
2）incubate 20 min（隔離）或30分鐘（消耗）在2°C給出了W-C-傾斜模和旋轉(zhuǎn)與溫柔。
3）在灌注管一磁鐵2分鐘。
（4）減少，轉(zhuǎn)移到新管supernatant進(jìn)一步使用。
（5）積極的分離，取消supernatant沐浴劑的beadbound細(xì)胞在緩沖區(qū)3 resuspending時報由1到原始樣品的體積，和單獨使用一個磁鐵1分鐘。不要使用小于1毫升緩沖在每個洗滌步驟1。生物分子研究，裂解細(xì)胞在安靜和附加到珠轉(zhuǎn)移到一個新的管supernatant蛋白或基因表達(dá)分析。
注意事項
關(guān)鍵步驟的細(xì)胞分離
1。給出了W-C-傾斜模和混頻器的使用提供一個旋轉(zhuǎn)的管dynabeads®確保不定居在底部管。
2。當(dāng)incubating dynabeads®和細(xì)胞，孵化溫度2°C，必須減少吞噬活動和其他代謝過程。
3。不要使用少于25µL（1×107）dynabeads®每毫升細(xì)胞樣品和至少4 dynabeads®通過靶細(xì)胞。