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微生物鑒定中常用的生化反應(yīng)
閱讀：277 發(fā)布時(shí)間：2018-7-19| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 61.1KB |
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實(shí)驗(yàn)試劑
淀粉培養(yǎng)基：蛋白胨培養(yǎng)基加0.2%的可溶性淀粉；
油脂培養(yǎng)基：蛋白胨培養(yǎng)基加花生油10mL、0.6%中性紅水溶液1mL；
明膠液化培養(yǎng)基：蛋白胨5g，明膠100～150g，水1000mL，pH7.2～7.4，115℃滅菌20min。
石蕊牛乳培養(yǎng)基：牛奶粉100g、石蕊0.075g、水1000 mL、pH6.8，121℃滅菌15 min。
實(shí)驗(yàn)材料
大腸桿菌(E. coli)、枯草桿菌(Bacillus subtilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)、黏乳產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes viscolactis)、銅綠假單胞菌(Psudomonas aeruginosa)、普通變形桿菌(Proteus vularis )
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 淀粉水解試驗(yàn)
1) 準(zhǔn)備淀粉培養(yǎng)基平板：將熔化后冷卻至50℃左右的淀粉培養(yǎng)基倒入無(wú)菌平皿中，待凝固后制成平板。
2) 接種：用記號(hào)筆在平板底部劃成兩部分，在每部分分別寫上菌名，用接種環(huán)取少量的待測(cè)菌，點(diǎn)接在培養(yǎng)基表面的相對(duì)應(yīng)部分的中心，其中一個(gè)菌種應(yīng)是枯草桿菌做對(duì)照菌。
3) 培養(yǎng)：將接種后的平皿置于28℃恒溫箱培養(yǎng)24h。
4) 檢測(cè)：取出平板，打開(kāi)平皿蓋，滴加少量的碘液于平板上，輕輕旋轉(zhuǎn)，使碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。菌落周圍如出現(xiàn)無(wú)色透明圈，則說(shuō)明淀粉已經(jīng)被水解，表示該細(xì)菌具有分解淀粉的能力?？梢杂猛该魅Υ笮≌f(shuō)明測(cè)試菌株水解淀粉能力的強(qiáng)弱。
2. 油脂水解試驗(yàn)
1) 將裝有油脂培養(yǎng)基的三角瓶置于沸水浴中熔化，取出并充分振蕩，使油脂均勻分布，再傾入無(wú)菌平皿中，待凝固成平板。
2) 接種：于同一平皿的兩邊接種，其中一種是金黃色葡萄球菌作為對(duì)照菌。置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24h，取出后觀察平板菌苔顏色，如果出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，即說(shuō)明脂肪被水解了，此反應(yīng)為正反應(yīng)。紅色斑點(diǎn)大小說(shuō)明測(cè)試菌株水解脂肪能力的強(qiáng)弱。
3. 明膠液化試驗(yàn)
1) 接種：用穿刺接種法接種大腸桿菌或產(chǎn)氣腸桿菌于明膠培養(yǎng)基中。
2) 培養(yǎng)：放20℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。若細(xì)菌在20℃下不長(zhǎng)，則應(yīng)放在適溫度下培養(yǎng)。
3) 觀察結(jié)果：觀察培養(yǎng)基有無(wú)液化情況及液化后的形狀。
因明膠在低于20℃時(shí)凝固，高于25℃時(shí)自行液化，若是在高于20℃下培養(yǎng)的細(xì)菌，觀察時(shí)應(yīng)放在冰浴中觀察，若明膠被細(xì)菌液化，即使在低溫下明膠也不會(huì)再凝固。
4. 石蕊牛乳試驗(yàn)
1) 接種：將黏乳產(chǎn)堿桿菌和銅綠假單胞菌接種入石蕊牛乳培養(yǎng)基中。
2) 培養(yǎng)：將接種后的試管于37℃恒溫培養(yǎng)7d，另外保留一支不接種的石蕊牛乳培養(yǎng)基作為對(duì)照。
3) 結(jié)果觀察：取出培養(yǎng)物，以不接種任何細(xì)菌的試管為對(duì)照，觀察接種不同細(xì)菌生長(zhǎng)后的變化情況。