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細胞傳代培養(yǎng)
閱讀：203 發(fā)布時間：2018-7-19| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 61.1KB |
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實驗材料
無菌磷酸生理緩沖液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca /Mg free, D-PBS,GibcoBRL 21600-010)
trypsin-EDTA solution (0.05% trypsin-0.53mM EDTA-4Na, GibcoBRL 25300-062)：以10 ml 分裝于15 ml 無菌離心管中，保存于–20 oC，使用前放在37℃水槽回溫。
新鮮培養(yǎng)基
無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶
實驗步驟
1 附著型胞(adherent cell)
1.1 吸掉舊培養(yǎng)液。
1.2 用D-PBS 洗滌細胞一至二次。
1.3 加入trypsin-EDTA 溶液(1ml/25cm2, 2ml/75cm2)，37 oC 作用數(shù)分鐘，于倒立顯微鏡下觀察，當細胞將要分離而呈現(xiàn)圓粒狀時，吸掉trypsin-EDTA 溶液。(若不移去trypsin-EDTA，則在trypsin-EDTA 作用后，加入適量含血清之新鮮培養(yǎng)基終止trypsin 作用，離心后再吸掉上清液。)
1.4 輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
2 懸浮型細胞(suspension cell)
2.1 吸出細胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心1000 rpm 5 分鐘。
2.2 吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
3 融合瘤(hybridoma)
3.1 有些hybridoma cell 需培養(yǎng)三天以上才會產(chǎn)生抗體，若是更換培養(yǎng)基，則可能會失去抗體。因此繼代培養(yǎng)不需離心后更換培養(yǎng)基，直接添加新鮮培養(yǎng)基稀釋細胞濃度即可。若體積太大，可傾斜放置，或分殖至新培養(yǎng)瓶中。