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外周血細(xì)胞瑞氏（Wright）染色及計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)
閱讀：314 發(fā)布時(shí)間：2018-12-10| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 250.8KB |
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實(shí)驗(yàn)方法原理
瑞氏染料中有美藍(lán)和伊紅兩種成分，前者為堿性，后者為酸性，它們與細(xì)胞內(nèi)的各種物質(zhì)具有不同的親和力，使其顯現(xiàn)出不同的色調(diào)。血細(xì)胞核由去氧核糖核酸和強(qiáng)堿性的組蛋白、精蛋白等形成核蛋白。這種強(qiáng)堿性的物質(zhì)與瑞氏染料中的酸性染料伊紅有親和力，所以染成紅色；核蛋白中還有少量的 弱酸性蛋白，它們又與染液中的堿性染料美藍(lán)起作用而染成藍(lán)色，但含量太少，藍(lán)色反應(yīng)極弱 ，故核染色呈現(xiàn)紫紅色。較幼稚的細(xì)胞之胞漿和細(xì)胞核之核仁中含有酸性物質(zhì)，它們與染料中的堿性染料美藍(lán)有親和力，故染成藍(lán)色。
實(shí)驗(yàn)材料 血液
試劑、試劑盒 瑞氏染料純甲醇磷酸二氫鉀磷酸氫二鈉
儀器、耗材 顯微鏡玻片蓋玻片滴管
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 制作血涂片
（1）滴一小滴血（約5 ul）于干凈玻片上，推片與玻片應(yīng)呈約30°角，用力均勻而較快，且不可復(fù)推。
（2）如血滴較小，推得較慢，角度小于30°，所制涂片較薄。
（3）如血滴較大，推得較快，角度比30°大時(shí)，則所制涂片較厚。
2. 將標(biāo)本放平（置于一個(gè)固定架上），用滴管將染液滴于涂片上，可用滴管將染液驅(qū)散，使其布滿整個(gè)涂片。
3. 染液布滿整個(gè)涂片后，稍等片刻或立即加入緩沖液，并使緩沖液與染液混均勻。
4. 染液與緩沖液的比例
（1）染液量要充足，否則染液很快蒸發(fā)，將染料沉淀于細(xì)胞上。
（2）染液與緩沖液的比例為1：2~4左右比較合適。
（3）稀釋度越大，染色時(shí)間越長，細(xì)胞著色較好，反之則越差。
5. 染色時(shí)間：視具體情況而定，一般約需10~30分鐘。
6. 沖洗：用自來水沖洗涂片上之染料。
7. 顯微鏡檢查：待自然干燥后用光學(xué)顯微鏡檢查。
收起
注意事項(xiàng)
1. 制作血涂片應(yīng)避免氣泡，厚度適中。
2. 染液與緩沖液的比例要適中。
其他
一、正常血細(xì)胞形態(tài)
1. 成熟紅細(xì)胞：正常紅細(xì)胞為兩面微 凹而呈盤狀，染色后則呈中心淺染之桔紅色細(xì)胞，平均直徑7.6 um。
2. 成熟中性粒細(xì)胞：PB中有兩種，桿狀核和分葉核。桿狀核粒細(xì)胞形態(tài)：圓形或橢圓形，直徑10~13 um。胞核如桿狀、帶狀，胞核之凹超過假設(shè)核圓徑的3/4，而且兩端的內(nèi)外有相當(dāng)一段的平行。染色質(zhì)凝固成塊狀，著色不均勻，其間可有空白區(qū)。胞漿內(nèi)已不含有嗜堿性物質(zhì)，而滿布中性顆粒。中性分葉核粒細(xì)胞：圓形，直徑10~13 um。核呈分葉狀，少者分兩葉，多者六、七葉以上，葉與葉之間有細(xì)絲相連或*斷開， 或互相重疊。染色質(zhì)成細(xì)塊狀。胞漿內(nèi)布滿中性顆粒。
3. 成熟淋巴細(xì)胞：圓形，直徑5~18 um。核圓形或擬蠶豆?fàn)?，染色質(zhì)致密成團(tuán)塊狀。胞漿量少，藍(lán)色，可有少許圓形、周邊整齊的嗜天青顆粒。大淋巴細(xì)胞胞漿量多，呈淡藍(lán)色
4. 單核細(xì)胞：圓形或不規(guī)則形，直徑12~20 um。胞核居中或偏一側(cè)，其形不規(guī)則。染色質(zhì)凝集如篩底狀或粗線條網(wǎng)狀，但無凝集的塊狀染色質(zhì)。胞漿量多，灰藍(lán)色，散布許多細(xì)小的粉紅色顆粒，顆粒多者甚至使胞漿成為粉紅色，可有空泡和外漿出現(xiàn)。
5. 血小板：正常血小板為星形、逗點(diǎn)狀或不規(guī)則狀，直徑2~5 um，呈淡藍(lán)色，中央推聚 干淡紫紅色的小顆粒。