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用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板相關(guān)抗體
閱讀：604 發(fā)布時(shí)間：2019-3-18| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 61.1KB |
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一種能夠通過(guò)胎盤存在于血小板表面的免疫球蛋白，被稱為血小板相關(guān)抗體（PA-IgG）。本實(shí)驗(yàn)來(lái)源「實(shí)用流式細(xì)胞術(shù)彩色圖譜」 王書奎、周振英主編。
實(shí)驗(yàn)方法原理 一種能夠通過(guò)胎盤存在于血小板表面的免疫球蛋白，被稱為血小板相關(guān)抗體（PA-IgG）。
實(shí)驗(yàn)材料 羊 F（ab+）2 2 IgG-PE抗體血樣
試劑、試劑盒 洗滌緩沖液
儀器、耗材 流式細(xì)胞儀
實(shí)驗(yàn)步驟
一、試劑
洗滌緩沖液（PBS/EDTA/BSA），PBS 緩沖液，含 10 mmol/L EDTA 和 0.5% BSA。
抗體：羊 F（ab+）2 抗-人 IgG（Fc Sp）-R-PE（H10104，Caltag 為多克隆抗體）。
陰性對(duì)照：羊 F（ab+）2 2 IgG-PE（11304，Caltag）。
二、樣本
正常人血樣 1 份，血小板數(shù)值在正常范圍，具體數(shù)目不詳。
患者血樣 2 份，為 1 個(gè)月齡的雙胞胎患者 1 和患者 2，均為貧血血小板，具體數(shù)目不詳。
三、步驟
1. 用含 EDTA 抗凝劑的血液收集管采血，3 個(gè)血樣均取 2 ml，分別加到 3 支流式標(biāo)準(zhǔn)管中。
2. 離心 500 r/min，將上清（富血小板血漿）轉(zhuǎn)到另外 3 支流式標(biāo)準(zhǔn)管中。
3. 離心 2500 r/min 3 min。吸去血漿，用與血漿等體積的洗滌緩沖液重懸血小板。如果必要，可用旋渦混合器混勻。
4. 用洗滌緩沖液洗滌血小板 3 次，每次離心 2500 r/min 3 min。
5. 適量洗滌緩沖液重懸血小板，用血球計(jì)數(shù)儀測(cè)定血小板的濃度，其中正常血樣血小板計(jì)數(shù)為 2000 /ul，患者 1 的血小板數(shù)為 6000 /ul，患者 2 的血小板數(shù)為 7000 /ul（稀釋濃度）。
6. 每個(gè)含重懸血小板的流式標(biāo)準(zhǔn)管分為兩管。A 管為檢測(cè)管，B 管為陰性對(duì)照管，共 6 只管。正常人血樣分別取 250 ul 于 2 支 流式標(biāo)準(zhǔn)管（A 管和 B 管）中，每管血小板總數(shù)為 5x106。分別取 80 ul 患者 1 的血樣于 2 支流式標(biāo)準(zhǔn)管（A 管和 B 管）中，每管血小板總數(shù)為 4.8x106。分別取 70 ul 患者 2 的血樣于 2 支流式標(biāo)準(zhǔn)管（A 管和 B 管）中，每管血小板總數(shù)為 4.9x106。
7. 將上述 6 支流式標(biāo)準(zhǔn)管，于 A 管均加 5 ul 羊 F（ab+）2 抗-人 IgG（Fc Sp），B 管均加 5 ul 羊 F（ab+）2 IgG。
8. 室溫，避光孵育 15 min。用洗滌緩沖液再洗 1 次，方法同步驟 4。
9. 去上清，加 0.5 ml 洗滌緩沖液重懸，上機(jī)分析。