飾紋汀蛙虹彩病毒BIV PCR檢測試劑盒是經(jīng)過精心優(yōu)化的、基于 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶和 Taq DNA 聚合酶的雙酶一管式RT-PCR 試劑盒，它含有除模版 RNA 和其專一性引物以外的所有 RT-PCR 試劑，包括MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA 聚合酶、RT-PCR 緩沖液等

飾紋汀蛙虹彩病毒BIV PCR檢測試劑盒是經(jīng)過精心優(yōu)化的、基于 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶和 Taq DNA 聚合酶的雙酶一管式RT-PCR 試劑盒，它含有除模版 RNA 和其專一性引物以外的所有 RT-PCR 試劑，包括MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA 聚合酶、RT-PCR 緩沖液等，可以在同一反應管內(nèi)完成 RNA→cDNA→PCR 反應 (RT-PCR 反應)，

飾紋汀蛙虹彩病毒BIV PCR檢測試劑盒特點如下：
1. 一管式完成 RT-PCR 反應，避免樣品交叉污染，尤其適合臨床應用。
2. 即開即用，用戶不需要單獨準備 RT-PCR 所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個 RT-PCR buffer 和 MMLV-Taq Mix，將加樣步驟減少到zui低，
極大降低了加樣誤差，增加了可重復性。
4. 使用范圍廣，適用于從病毒 RNA 到人 RNA 的各種 RNA 模板。
5. 高靈敏度，每個 RT-PCR 體系zui低可以檢測 200 拷貝的 RNA 分子，可擴增的模版
RNA 的zui長達 2000 nt。
6. 所得 RT-PCR 產(chǎn)物可以直接用于 AT 克隆。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 50 次包裝
雙酶一管式 RT-PCR Buffer（2×） 750 uL
MMLV-Taq Mix 100 uL
RNase-free 水 80403 1 mL
使用手冊 91202sc 1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
自備試劑
1. RNA 模板：總 RNA，mRNA。
2. 專一性引物和探針（引物、探針應用 HPLC 或 PAGE 純化）。
3. RNase-free & DNase-free 的 tip 頭，離心管,薄壁 PCR 管等。
4. 各種規(guī)格的移液器。
5. 常規(guī)或 Real-time PCR 儀。本產(chǎn)品適用于下列 Realtime PCR 儀：ABI PRISM
7700、ABI PRISM 7500、ABI PRISM 7300、ABI PRISM 7000、MJ Opticon 、
BIORAD iCycler 、Roch LightCycler 等，具體使用方法請參照相應儀器的說明
書。
使用方法 注意：所有離心管用前zui全部短暫離心幾秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一個
30uL 體系的 RT-PCR 為例，如果體積不同，各成分用量需要適當調(diào)節(jié)。
1. 在一干凈的無 RNase 的 PCR 管中，先加入下列成分：
成分 陰性對照 樣品
RNA 模板（自備，分下面三種情況） 無 見下
總 RNA 無 100-500 ng
或 poly(A) mRNA 無 10-500 ng
或體外轉(zhuǎn)錄得到的專一 RNA 無 0.01 pg-500ng
RNA 特異性引物一（自備） 終濃度 300nM 終濃度 300nM
RNA 特異性引物二（自備） 終濃度 300nM 終濃度 300nM
探針（僅對 Realtime RT-PCR） 終濃度 200nM 終濃度 200nM
RNase-free 水 補到 13 uL 補到 13 uL
雙酶一管式 RT-PCR Buffer（2×） 15 uL 15 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL
注：通常初次使用本試劑時，可用引物濃度 300nM，探針濃度 200nM 進行實驗，
根據(jù)實驗結(jié)果具體情況，在 200～800nM 范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度，在 50～400nM 范
圍內(nèi)調(diào)整探針濃度以達到*檢測效果。引物、探針、待檢樣品的具體加量用戶可以
根據(jù)實際情況調(diào)整，同時增減 DEPC 水用量，保證總反應體積不變即可。
2. 輕柔混合均勻后放入 PCR 儀中進行 RT-PCR。
3. 設(shè)定 RT-PCR 反應條件時，一般將 RT 的條件設(shè)定成 42℃ 30 分鐘，后接 94℃變
性 5 分鐘，然后進入 PCR 循環(huán)（PCR 參數(shù)將根據(jù)自備引物的 Tm 值由用戶自行決
定注）、zui后 72℃ 5 分鐘。對 Realtime PCR，在復性步驟設(shè)置熒光檢測，檢測通
道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR 結(jié)束后取 5-10 uL 電泳檢查。
注意事項
1. 使用已校準的移液器，選用一次性 PCR 反應管、離心管、tip 頭等進行樣本處理及
配液等操作，所有用具應不含 DNA 酶和 RNA 酶。
2. 引物、探針設(shè)計過程中應盡可能避免發(fā)夾結(jié)構(gòu)、二聚體等現(xiàn)象的發(fā)生，探針的位置
盡可能靠近上游引物, PCR 目標片段zui小于 200bp，盡可能在 150bp 以內(nèi)。
3. 實驗樣品盡可能新鮮，提取過程應嚴防 RNA 酶污染及操作不當導致的 RNA 降解。
4. 使用本產(chǎn)品時建議對 RT-PCR 擴增條件、引物濃度和樣品用量進行調(diào)整，選擇zui適
當?shù)囊餄舛取悠窛舛群?PCR 擴增條件。
5. 本產(chǎn)品使用前應在室溫充分融解，并用漩渦震蕩器充分混勻。
6. 統(tǒng)一配液后分裝以減少加樣誤差，每次實驗應設(shè)置陰性對照。
7. 禁止標記 PCR 反應管，避免外源性熒光信號干擾。
8. PCR 反應管中不能有氣泡，否則會產(chǎn)生非特異的熒光信號。若有氣泡，可先用手指
將氣泡彈破，然后再低速離心消除。
9. 實時熒光 PCR 儀器連續(xù)進行實驗時，zui間隔一小時以上再使用。
10. 實時熒光 PCR 儀需經(jīng)常校正和清潔載樣板板孔。
11. 若使用 Roch LightCyclerTM 熒光 PCR 儀，應將毛細管放在專門套管中，以便分
裝反應體系和加入待檢樣品。前述操作完畢應低速離心數(shù)秒再將毛細管垂直緩慢放
入樣品架，以免折斷；若發(fā)生折斷，應小心取出，用小毛刷擦拭干凈后方可進
行擴增。
12. 實驗室應嚴格分區(qū)，避免 PCR 產(chǎn)物污染。
雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 兩管式 RT-PCR 試劑盒(CAT#:80206)：此產(chǎn)品適合于制備長 cDNA 用于構(gòu)建 cDNA 文
庫。