詳細(xì)介紹
犬瘟熱病毒RT-PCR檢測試劑盒犬瘟熱病毒(Canine Distemper Virus,CDV)在分類上屬副黏病毒科(Paramyxoviridae)、麻疹病毒屬(Morbillivirus),是一種單鏈 RNA 病毒,RNA 長度為 16 K 堿基,病毒顆粒直徑約 250 nm。CDV 是感染犬的一種zui古老的、臨床意義zui大的病毒。感染的自然宿主為犬科動物和鼬科動物,CDV感染病型復(fù)雜多樣,臨床上診斷很困難,易與上呼吸道感染、犬傳染性肝炎、犬冠狀病毒感染等相混淆,因此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品,用于定性鑒定檢測
CDV。
犬瘟熱病毒RT-PCR檢測試劑盒具有下列特點(diǎn):
1. 用于定性檢測 CDV 病毒,靈敏度高遠(yuǎn)高于 ELASA 檢測法。
2. 特異性高,不會誤檢犬細(xì)小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)和狂犬病病
毒(RV)等常見犬類病毒。
3. 使用一管式 RT-PCR 試劑盒,減少了操作步驟,降低了操作誤差。
規(guī)格及成分 成 份 50 次塑料袋包裝
雙酶一管式 RT-PCR Buffer,2× 750 uL
MMLV-Taq Mix 100 uL
CDV 專一性引物對 100 uL
CDV 陽性對照 50 uL
超純水 1 mL
使用手冊 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。
自備試劑 犬瘟熱病毒 RNA。
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
用自選方法純化 CDV 樣品的 RNA,也可以另購本公司的一管式病毒
RANout 或柱式病毒 RNAout,上述兩款產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。
二、陽性對照
1. 為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性
對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 使用本陽性對照時,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成
分。zui在專門的區(qū)域操作。
三、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)(30 uL 體系)
3. 在 PCR 管中加入下列成分:
成 份 樣品 陽性對照 陰性對照
雙酶一管式 RT-PCR Buffer,2× 15 uL 15 uL 15 uL
CDV 專一性引物對 2 uL 2 uL 2 uL
樣品 RNA 1-5 uL 無 無
CDV 陽性對照 無 2 uL 無
補(bǔ)超純水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 輕柔混勻后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR。
過程 溫度 時間
逆轉(zhuǎn)錄 42℃ 60 分鐘
預(yù)變性 95℃ 3 分鐘
PCR 反應(yīng)
(30 個循環(huán))
94℃ 40 s
52℃ 30 s
72℃ 15 s
延伸 72℃ 5 分
5. 電泳檢測 RT-PCR 產(chǎn)物。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 192bp。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 犬細(xì)小病毒 PCR 試劑盒(CAT#:11-150)。
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