茜素紅S染色試劑盒茜素紅 S（Alizarin Red S）染色試劑中的茜素紅 S 可通過與鈣離子和其他金
屬離子發(fā)生鰲和反應(yīng)而形成可以在顯微鏡下直接觀察的帶顏色的復(fù)合物。本產(chǎn)品就是基于此原理而開發(fā)

茜素紅S染色試劑盒具有下列特點(diǎn)：

1． 即開即用，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備各種溶液。
2． 操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。
3． 可用于組織切片中的鈣沉積，尤其適用于骨細(xì)胞或組織的病理和生理研究。
4． 可用于檢測動(dòng)物原生代或培養(yǎng)細(xì)胞的鈣沉積。
5． 本產(chǎn)品為通用型，不但用于鈣離子的檢測，還可用于 FeCl2和 CdCl2的檢測。 規(guī)格及成分 成 份 編 號 小扁盒包裝
茜素紅 S 染色液 121105A 100 mL（棕色塑料瓶）
茜素紅 S pH 調(diào)節(jié)液 121105B 10 mL
使用手冊 121105sc 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。 自備試劑 光學(xué)顯微鏡、乙醇、丙酮、二甲苯
使用方法 注意：試劑具有腐蝕性，操作時(shí)須帶手套。實(shí)驗(yàn)時(shí)可以用含金屬離子的切片或培養(yǎng)
細(xì)胞作為陽性對照?？扇苄缘鞍讜?huì)干擾茜素紅 S 與鈣的相互作用，所以樣品必須
經(jīng)過固定處理（以去除細(xì)胞中的可溶性蛋白）。對培養(yǎng)細(xì)胞，還必須洗滌去掉培養(yǎng)
基（含血清等蛋白成分）。茜素紅 S 與鈣的螯合反應(yīng)需要在水相發(fā)生，因此加入茜
素紅 S 前zui用水溶液洗滌掉前面操作所殘留的有機(jī)溶劑。
一：茜素紅 S 染色液的準(zhǔn)備
1. 根據(jù)所需檢查的金屬離子按下表選擇茜素紅 S 染色液的* pH。
金屬離子 * pH 呈現(xiàn)的顏色
CaCl2，CaPO4、CaCO3 4.28-6.75 橙紅
FeCl2 5.62-8.05 深紫
CdCl2 5.11-5.78 品紅
2. 用茜素紅 S pH 調(diào)節(jié)液將茜素紅 S 染色液調(diào)到所需的 pH 值。
二：染色載片上細(xì)胞
3. 用緩沖中性福爾馬林、福爾馬林-乙醇混合液或乙醇作為固定劑固定鋪在載玻
片上的細(xì)胞（本試劑盒不提供上述固定劑）。
4. 將細(xì)胞放入 95%乙醇中處理。
5. 將載玻片在空氣中干燥。
6. 將載玻片放在裝有茜素紅 S 染色液的染色缸中染色 1-5 分鐘。注意：此步需
要密切控制，zui每隔一分鐘放在顯微鏡下檢測，*時(shí)間隨樣品中鹽離子的
多少不同而不同。
7. 用蒸餾水洗滌載片一次。
8. 用丙酮浸泡載波片 30 秒。
9. 用丙酮-二甲苯混合液（50：50）浸泡浸泡載波片 15 秒。
10. 肉眼可見紅色或紫色（取決于所檢查的離子）即可終止染色，放光學(xué)顯微鏡觀
察。鈣沉積陽性細(xì)胞將呈現(xiàn)桔紅色。
三：染色石蠟包埋切片
11. 按常規(guī)方法進(jìn)行固定、包埋、切片、脫蠟和水化等操作，直到 70%乙醇處理
這步。注意：固定劑zui使用 4%的副甲醛或 10%福爾馬林，切片厚度zui
在 0.4 um。
12. 將切片浸入蒸餾水中。
13. 將切片浸泡在茜素紅 S 染色液中 30 秒-5 分鐘，具體時(shí)間以肉眼或顯微鏡下
可見桔紅色斑點(diǎn)為準(zhǔn)。
14. 用濾紙吸盡染色液后浸入丙酮 20 次。
15. 再進(jìn)入丙酮-二甲苯混合液（50：50）20 次。
16. zui后用二甲苯處理并用封固劑封片。
四：染色細(xì)胞培養(yǎng)（zui是 26 或 6 孔培養(yǎng)板培養(yǎng)的細(xì)胞，便于在顯微鏡下觀察）
17. 小心抽去培養(yǎng)液，注意不要吸走細(xì)胞。
18. 沿壁上緩慢加入 1-2 mL 自備的 1×PBS 或 HBSS 緩沖液，然后再小心將加
入的液體吸出。
19. 每孔中加入自備的無水乙醇直到全部覆蓋細(xì)胞，室溫放置 30 分鐘后小心移棄
無水乙醇，室溫晾干。此步用于固定細(xì)胞。也可用 10%甲醛代替無水乙醇，
但固定時(shí)間只需要 15 分鐘，同時(shí)還需要用蒸餾水洗滌 3 次才能進(jìn)入下一步。
每次洗滌時(shí)，先加入蒸餾水，再浸泡 5-10 分鐘，然后小心吸走蒸餾水。注意：
操作時(shí)不要破壞細(xì)胞單層。
20. 每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔中加入 1mL 茜素紅 S 染色液，在室溫下孵育至少 20 分鐘，
zui后小心吸走茜素紅 S 染色液。
21. 加入 1 mL 蒸餾水，然后小心吸走蒸餾水。此為洗滌步驟。注意：洗滌一定不
要震蕩以避免形成的鈣沉積物脫落。
22. 重復(fù)上步操作 3 次（共洗滌 4 次）。
23. 樣品可立即用于顯微鏡檢測。有鈣沉積的細(xì)胞將呈現(xiàn)桔紅色。 相關(guān)信息 茜素紅 S(alizarin red S； sodium alizarin sulfonate)是橙黃色的針狀體，
CAS 號是 130-22-3，分子式為 C14H7NaO7H2O，分子量為 360.28，中文別
名是茜素紅、茜素磺酸鈉、茜素 S、酸性媒介茜素紅、酸性媒介紅 S-80（Acid
Mordnat Reds-80）和 C.I.媒介紅 3（C.I.Mordant Red 3）。溶于水，微溶于醇，
不溶于氯和苯。1%水溶液 pH 為 2.15。由茜素經(jīng)發(fā)煙硫酸磺化，然后轉(zhuǎn)變?yōu)?br />鈉鹽制得。茜素紅能和許多金屬離子生成穩(wěn)定的紅色絡(luò)色物，在分析中常用作金
屬指示劑；也可以作為酸堿指示劑，其*變色范圍 pH 值 3.7（黃）～5.2（紫），
第二變色范圍 pH 值 10.1（紫）～12.0（淺黃）。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 茜素紅 S 定量檢測試劑盒