DOP-PCR試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品利用 Pfu DNA polymerase 所具有 3’到 5’的聚合酶活性和5’到 3’外切酶活性，將 3’和/或 5’突出的 DNA 段轉(zhuǎn)化成平末端, 用于克隆工作。

1. 簡(jiǎn)單，精心優(yōu)化過(guò)的 2 X Polishing Buffer 中含有所需要的所有成
分，不需要單獨(dú)準(zhǔn)備。
2. 適用于任何平末端的 DNA 載體。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 20 次包裝
2 X Polishing Buffer 60107A 0.5 mL
Pfu DNA Polymerase（3U/uL） 60107B 20 ul
使用手冊(cè) 60107sc 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。
自備試劑 DNA 段
DOP-PCR試劑盒使用方法 1. DNA 段的準(zhǔn)備：
無(wú)論是來(lái)源 Taq, Tth, T7, Klenow 和 Vent 等 DNA 聚合酶合成的 DNA
片段，還是用限制性?xún)?nèi)切酶制備的 DNA 段，粘轉(zhuǎn)平之前均需要將 DNA 沉
淀以便去除反應(yīng)液中的無(wú)關(guān)成份。沉淀 DNA 的方法包括經(jīng)典的鹽/純沉淀法，
離心柱 DNA 吸附法和天澤基因的一管式非醇超快 DNA 沉淀法。
2. 設(shè)置粘轉(zhuǎn)平（Polishing）反應(yīng)：
在一個(gè)干凈的離心管中，分別加入
10-500 ng 3’或 5’突出的 DNA 段
25 uL 2 X Polishing Buffer
1 uL Pfu DNA polymerase
補(bǔ)水到 50 uL
72℃保溫 2 小時(shí)。
DNA粘轉(zhuǎn)平試劑盒注意：如果不使用熱蓋式 PCR 儀器加熱，則需要在反應(yīng)管中再加入適量
液體石蠟以防反應(yīng)過(guò)程中水份蒸發(fā)。
3. 反應(yīng)后處理
粘轉(zhuǎn)平反應(yīng)后，樣品可以放-20℃長(zhǎng)期保存，也可以直接用于 T4 DNA 連
接酶催化的連接反應(yīng)。對(duì) 10 uL 的連接反應(yīng)體系，一般需要加入 1-2 uL 粘
轉(zhuǎn)平反應(yīng)液。由于 Pfu DNA polymerase 在連接反應(yīng)的溫度條件下幾乎沒(méi)有
活性，所以不必去除。但文獻(xiàn)報(bào)道，去除后連接效率更高。
相關(guān)資料
常見(jiàn) DNA 聚合酶的粘轉(zhuǎn)平效率
聚合酶 5’突出的堿基種類(lèi)
A C G T 平均（%）
Taq 4 10 1 75 22.5
Klenow 12 3 20 67 25.5
T4 89 86 96 91 90.5
Pfu 93 89 93 89 91
 ----NAR 22:2423, 1994
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 dA-Tailing Kit、dT-Tailing Kit